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中国水仙(Narcissus tazetta Lin.var.chinensis Roem)为石蒜科水仙属植物,多年生草本,是多花水仙的一个变种。福建漳州是中国水仙主要产地之一,漳州水仙于2008年获得国家地理标志驰名商标。目前,花色单一己成为制约中国水仙发展的主要障碍之一,因此,对中国水仙进行花色改良具有重大的意义。本研究以漳州水仙品种‘金盏银台’为材料,采用RT-PCR和RACE技术,克隆得出了中国水仙ZDS(ζ-胡萝卜素脱氢酶基因)cDNA全长序列和LYCE(番茄红素ε-环化酶基因)片段序列,并对ZDS进行原核表达研究,为下一步利用花色基因进行遗传转化奠定基础,以期为中国水仙花色遗传改良提供一条新途径。主要研究结果如下:1、提取中国水仙花瓣和副冠的总RNA,反转录为cDNA二链,并以此为模板克隆类胡萝卜素合成途径中的关键基因ZDS(登录号为:EU573238),ZDS全长2189 bp,其中包含69 bp5′非编码区,395 bp3′非编码区,1725 bp的编码区(编码574个氨基酸,分子量约为63.6 kDa)。通过BLAST工具对比发现,该ZDS氨基酸序列与黄水仙(CAA12062.1)、葡萄(CAO43021.1)和蜜柑(BAB68552.1)的ZDS基因cDNA的同源性都很高,分别为97%、85%和83%。2、将分离的中国水仙ZDS基因cDNA的编码区序列插入含有EcoRI和XhoI酶切位点的pET-28a原核表达载体上,并在大肠杆菌BL21细胞中进行原核表达,结果表明,该编码区片段在大肠杆菌中表达,分子量约为63.6 kDa的蛋白质,与理论值相符。3、采用RACE方法获得LYCE cDNA片段序列长1235 bp,编码371个氨基酸残基,其推导的氨基酸序列与胡萝卜(ABB52073.1)、柚子(AAX92679.1)、甜橙(AAS48096.1)和温州蜜桔(BAE93359.1)的氨基酸序列同源性分别为80%、76%、76%和75%。