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目的2型糖尿病(T2DM)合并下肢动脉病变(Lower extremity arterial disease,LEAD)是糖尿病的常见并发症,与非糖尿病患者相比,2型糖尿病患者LEAD患病风险明显增加,且发病早,病变重,治疗难度大,是一种由环境和遗传因素共同作用的疾病。基因多态性,以及许多非遗传因素(如年龄、糖尿病病程、吸烟、血脂异常、高血糖、高血压)在其发生中扮演着重要角色,但研究结果不一致。目前多数研究表明瘦素(Leptin,LEP)与瘦素受体(Leptin receptor,LEPR)基因多态性与肥胖、高血压、心脑血管疾病密切相关。目前尚无关于LEP与LEPR基因多态性及与非遗传因素交互作用对下肢动脉病变的影响的报道。对象与方法一、研究对象的选择选取2015年5月至2016年11月于华北理工大学附属医院内分泌科住院的2型糖尿病患者789例为研究对象,LEAD人数为380例,非LEAD人数为409例。二、实验室检测抽取受试者空腹静脉血8ml,检测总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、甘油三酯(TG)和糖化血红蛋白(Hb Alc)及瘦素(LEP)。抽取静脉血3ml于EDTA抗凝管内,提取DNA,以聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)检测瘦素(LEP)基因G2548A位点、rs3828942位点,瘦素受体(LEPR)基因Gln223Arg位点、Prol019Pro位点多态性。三、统计学分析以Epidata 3.0录入数据库,SPSS 17.0进行数据分析。定量资料以((?)±s)表示,两组间比较采用t检验,定性资料比较采用c2检验。多因素logistic回归分析LEAD发病的危险因素。叉生分析法分析LEP及LEPR基因各基因位点基因与基因、环境与基因交互作用对LEAD的影响。实验结果一、环境因素与LEAD的关系与非LEAD患者相比,年龄、性别、BMI、TG、HDL、吸烟差异无统计学意义(P>0.05);Hb A1c、TC、LDL-C、Leptin、糖尿病病程、高血压、冠心病和脑梗死差异均有统计学意义(P<0.05)。糖尿病患者LEAD患病率随着年龄增加而增加(c2趋势=108.874,p<0.001)。多因素logistic回归显示:年龄、高TC血症、高LDL-C血症、高Hb Alc水平、糖尿病病程、高血压、冠心病、脑梗塞、leptin水平是LEAD患病的独立危险因素(P<0.05)。二、瘦素及瘦素受体基因多态性与LEAD的关系LEP基因2548G/A位点AA、AG、GG基因型在非LEAD组(44.3%、42.3%、13.4%)与LEAD组(34.7%、44.7%、20.5%)分布具有统计学差异(χ2=10.623,P=0.005)。LEAD组G等位基因频率(38.6%)高于非LEAD组(34.6%)(c2=11.447,P=0.001)。多因素回归结果显示,携带LEP基因2548G/A位点GG基因型者发生LEAD的风险是AA基因型的1.998(95%CI:1.316~3.017)倍,GG因型可能是LEAD的易感基因型。LEP基因rs3828942位点AA、AG、GG基因型在非LEAD组(45.5%、43.0%、11.5%)与LEAD组(43.2%、43.7%、13.2%)分布无统计学差异(c2=0.703,P=0.704)。病例组G等位基因频率(35.0%)与非LEAD组(33.0%)相比,差异无统计学意义(c2=0.697,P=0.404)。多因素分析表明不能认为rs3828942多态性与LEAD有关。LEPR基因Gln223Arg位点AA、AG、GG基因型在非LEAD组(10.3%、39.4%、50.4%)与LEAD组(6.3%、35.3%、58.4%)分布具有统计学差异(c2=6.922,P=0.031)。LEAD组G等位基因频率(76.1%)高于非LEAD组(70.0%)(c2=7.195,P=0.007)。多因素回归结果显示,携带LEPR基因Gln223Arg位点GG基因型者发生LEAD的风险是AA基因型的1.816(95%CI:1.100~3.108)倍,提示GG基因型可能是LEAD的易感基因型。LEPR基因Pro1019Pro位点GG、AG、AA基因型在非LEAD组分布(16.6%、44.3%、39.1%)与LEAD组(11.3%、41.6%、47.1%)具有统计学差异(c2=7.200,P=0.027)。LEAD组A等位基因频率(67.9%)高于非LEAD组(61.2%)(c2=7.599,P=0.006)。多因素回归结果显示,携带LEPR基因Pro1019Pro位点AA基因型者发生LEAD的风险是GG基因型的1.717(95%CI:1.109~2.658)倍,提示AA基因型可能是LEAD的易感基因型。三、基因-基因交互作用对LEAD影响的分析本次研究的LEP基因及LEPR基因的4种多态位点间未显示出基于相加模型的交互作用(P>0.05)。四、基因-环境因素交互作用分析叉生分析中,Gln223Arg与LDL-C显示出基于相加模型的交互作用(U=2.658,P=0.008),交互作用指数(S)=5.310,两者可能具有正交互作用,交互作用归因比(AP)=0.570,纯交互作用归因比(AP*)=0.812,交互作用超额相对危险度(RERI)=1.918,交互作用比值比(ORint)=2.269。Gln223Arg与Hb A1c显示出基于相加模型的交互作用(U=2.152,P=0.031),交互作用指数(S)=7.027,两者可能具有正交互作用,交互作用归因比(AP)=0.522,纯交互作用归因比(AP*)=0.858,交互作用超额相对危险度(RERI)=1.332,交互作用比值比(ORint)=2.074。本次研究的4种基因的多态位点与TC、高血压、冠心病、脑梗塞均未显示出基于相加模型的交互作用,P>0.05。结论1、糖尿病人群中,高TC、高LDL_C、高Hb Alc、糖尿病病程、年龄、高leptin、高血压、冠心病、脑梗塞是LEAD发生的独立危险因素。2、LEP基因位点G2548A,LEPR基因位点Gln223Arg和Prol019Pro多态性是糖尿病人群LEAD患病的独立风险因素。3、LEP基因2548G/A位点、rs3828942位点,LEPR基因Gln223Arg位点Pro1019Pro位点间未显示出基于相加模型的交互作用。4、在对糖尿病患者LEAD的影响中,LEPR基因Gln223Arg位点与Hb A1c、LDL-C存在基于相加模型的正交互作用。