论文部分内容阅读
Toll样受体（toll like receptors，TLRs）是果蝇Toll的同系物，它们广泛存在于植物及动物体内，是物种进化保留下来的保守序列。自1997年发现第一个哺乳动物TLRs以来，现已发现的TLRs有12个。这些进化保守的受体与果蝇的Toll蛋白在结构上有高度的同源性，识别表达在病原微生物或其裂解产物上高度保守的结构基序，继而引发的信号转导可导致炎性介质的释放，在天然免疫防御中起重要作用，同时也可激活获得性免疫系统。TLRs家族的作用并不仅仅限于抗感染免疫，在自身免疫病、超敏反应、移植排斥、缺血再灌注损伤及肿瘤免疫中也发挥作用。 TLR2是TLRs家族中识别范围最广的成员，在过去的几年中得到了广泛的研究。本研究拟对多种组织来源的小鼠肿瘤细胞TLR2的表达情况进行检测，然后观察TLR2的激动剂对肿瘤细胞生长情况的影响；同时构建含TLR2反义序列的质粒——pcDNA3.1（-）-mTLR2（-），并将其转染进入NS-1细胞株内，下调NS-1细胞株TLR2的表达水平，通过在小鼠体内建立肿瘤模型来观察TLR2在肿瘤中的作用。 一、小鼠肿瘤细胞TLR2表达及稳定表达反义TLR2的NS-1细胞株的建立 根据已发表的检测小鼠TLR2及β-actin的文献合成两对引物：P1、P2（TLR2）和P3、P4（β-actin）。Trizol提取小鼠肿瘤细胞株EMT-6、RM-1、SP2／0、YAC-1，FBL3、NS-1、RAW264.7和对照细胞株人淋巴瘤U937总RNA，以Oligo（dt）18为引物，进行反转录获得cDNA；然后再以cDNA为模板，分别用P1、P2和P3、P4为引物，进行PCR扩增。结果以P3、P4为引物的PCR反应，均扩增出约350bp的特异性扩增带。而以P1、P2为引物的PCR反应，除U937细胞株外，