论文部分内容阅读
研究目的：1.探讨肿瘤靶向肽TMTP1标记放射性核素99mTc (99mTc-HYNIC-TMTP1)是否可以作为新型肿瘤SPECT显像剂。2.探讨多肽TMVP1标记放射性核素99mTc (99mTc-HYNIC-TMVP1)是否可以作为肿瘤VEGFR3分子SPECT显像剂。3.探讨多肽TMVP1标记放射性核素68Ga(68Ga-DOTA-TMVP1)是否可以作为肿瘤VEGFR3分子PET显像剂。研究方法：1.选择HYNIC作为TMTP1标记99mTc的双功能螯合剂,EDDA为共配体。人工合成多肽HYNIC-TMTP1,利用正文中所述的标记方法将多肽标记上放射性核素99mTc, Sep-pak C18柱子纯化,HPLC和iTLC-SG检测其99mTc-HYNIC-TMTP1纯化前和纯化后其放射性化学纯度。99mTc-HYNIC-TMVP1的采取同样的标记方法、纯化及质量控制。2.选择DOTA作为标记TMVP1标记68Ga的双功能螯合剂,G3作为PKMlinker。人工合成多肽DOTA-GGG-TMVP1,采用正文中所述的标记方法,标记后Sep-pak C18柱子纯化,HPLC和iTLC-SG检测其68Ga-DOTA-TMVP1纯化前和纯化后其放射性化学纯度。3.验证上述合成的三种显像剂在体内体外的稳定性,测定其酯水分离系数(LogD)=体外利用高低转移肿瘤细胞系(高转移肿瘤细胞系SKOV3. ip和MNK-45、低转移肿瘤细胞系SKOV3)检测99mTc-HYNIC-TMTP1对高转移肿瘤细胞的结合特性。4.建立卵巢癌异位移植小鼠模型,99mTc-HYNIC-TMTP1静脉注射后在不同的时间点对小鼠模型SPECT显像。竞争性抑制试验是在99mTc-HYNIC-TMTP1注射30分钟前注射300μ g的HYNIC-TMTP1,然后再不同时间点对小鼠SPECT显像。将99mTc-HYNIC-TMTP1注射入SKOV3. ip荷瘤小鼠中,在不同的时间点解剖小鼠的各个器官及肿瘤组织,r-counts计数各个组织的放射性计量,并计算各个器官%ID/g及T/B值。5.建立乳腺癌和宫颈癌模型,如上述4方法研究99mTc-HYNIC-TMVP1对肿瘤模型的SPECT显像效果及乳腺癌模型的体内分布情况。6.建立宫颈癌和乳腺癌模型,如上述4方法研究68Ga-DOTA-TMVP1对肿瘤模型的microPET显像及在C33A宫颈癌模型的体内分布情况。结果1.99mTc-HYNIC-TMTP1、99mTc-HYNIC-TMVP1和68Ga-DOTA-TMVP1的标记效率均大于90%,且三种显像剂能够在生理盐水、半胱氨酸及正常血清中稳定性存在4小时以上。体外细胞99mTc-HYNIC-TMTP1显示其与高转移细胞系SKOV3. ip和MNK-45特异性的高结合。2. SPECT显像显示99mTc-HYNIC-TMTP1能够对SKOV3. ip和MNK-45高转移皮下瘤显像,99mTc-HYNIC-TMTP1通过泌尿系统排泄,且在肾脏的聚集尤其明显。99mTc-HYNIC-TMVP1能够对乳腺癌和宫颈癌模型的皮下瘤显像,且肿瘤显像效果优于99mTc-HYNIC-TMTP1。99mTc-HYNIC-TMVP1同样经过肾脏排泄,但是在肾脏的聚集弱于99mTc-HYNIC-TMTP1。3.体内分布实验实验结果与SPECT显像一致,99mTc-HYNIC-TMTP1静脉注射2小时后其在肿瘤的摄取为0.182±0.017%ID/g。99mTc-HYNIC-TMTP1主要通过泌尿系统排泄,在肾脏的聚集明显高于其它脏器(在1小时和两小时分别为135.32±20.17%ID/g和74.32±15.35%ID/g)。99mTc-HYNIC-TMVP1主要亦经过泌尿系统排泄,其肾脏在2小时百分剂量率为23.7±4.23%ID/g,是其他器官的20倍多。其在4T1肿瘤的分布2小时为0.65±0.12%IDfg。4.对乳腺癌和宫颈癌肿瘤模型MicroPET显像结果显示68Ga-DOTA-TMVP1对C33A、HeLa和SKBR3皮下瘤均显像,其中肾脏显像和肿瘤显像效果相近,心脏有模糊的显像。体内分布实验显示68Ga-DOTA-TMVP1同样主要通过泌尿系统排泄,C33A荷瘤小鼠皮下瘤1小时时摄取68Ga-DOTA-TMVP12.00±0.24%ID/g,肾脏摄取2.74±0.30%ID/g,血液保留0.66±0.01%ID/g,肌肉摄取0.26±0.28%ID/g, T/B和T/M分别为3.03和7.81。2小时时摄取68Ga-DOTA-TMVP11.10±0.09%ID/g,肾脏摄取2.34±0.21%ID/g,血液保留0.45±0.05%ID/g,肌肉摄取0.15±0.03%ID/g, T/B和T/M分别为2.45和7.11。结论：99mTc-HYNIC-TMTP1是一个潜在的高转移肿瘤SPECT显像剂,但是要考虑其在肾脏内大量聚集对周围组织的影响。99mTc-HYNIC-TMVP1和68Ga-DOTA-TMVP1都可以作为肿瘤组织VEGFR3分子显像剂。68Ga-DOTA-TMVP1与99mTc-HYNIC-TMVP1相比较,68Ga-DOTA-TMVP1因为具有更高的肿瘤摄取和更低的肾脏聚集,因此其有更高的临床开发的价值。