大黄提取物抗氧化活性与化学成分相关性研究

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大黄为我国传统常用中药材,具有泻下作用,抗菌性,止血性、抗肿瘤等多种生物学活性,在临床上有着广泛的应用。其药理有效成分一般认为主要是蒽醌类衍生物,包括大黄酸、大黄素、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素甲醚等。目前,将大黄的抗氧化活性与抗氧化活性化合物含量相关联的研究较少。为了天然抗氧化剂的开发利用,本论文利用HPLC-DAD联用色谱仪器和中药谱效学方法,结合能有效利用色谱和光谱信息的化学计量学方法,实现对大黄抗氧化活性的预测。主要涉及三个方面:大黄抗氧化活性研究;利用联用色谱仪器对大黄提取物有效成分的定性定量分析;结合化学计量学多元校正方法进行大黄蒽醌含量、色谱指纹图谱与抗氧化活性的相关性研究,将植物抗氧化剂的抗氧化活性与抗氧化活性化合物的含量相关联,以及建立中药大黄色谱指纹图谱与提取物抗氧化活性的谱效学关系模型。本论文的主要内容如下:第一章简要介绍了自由基与抗氧化剂,天然抗氧化剂的开发,大黄的研究概况,化学计量学在中药研究中的应用、中药谱效学研究等内容。第二章以大黄提取物清除DPPH自由基的能力为参考指标,考察溶剂种类、乙醇浓度、料液比、提取时间和提取次数等因素对大黄提取物抗氧化活性的影响,优化大黄抗氧化物的提取条件。确定了大黄抗氧化物的最佳超声提取工艺为:以70%乙醇为溶剂、料液比为1:30(g/mL)、超声提取2次、每次提取20 min。不同提取方法实验表明,相同条件下所得大黄提取物清除DPPH·能力依次为超声提取>浸提>回流提取,超声提取物清除率可达95.2%。第三章建立了同时测定大黄药材中五种蒽醌类衍生物(芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚)含量的RP-HPLC法。五种游离蒽醌均具有较宽的线性范围并呈良好的线性关系(R~20.9987~0.9997),平均回收率为92.79%~99.28%,日内精密度为0.65%~1.71%,日间精密度为2.52%~3.46%。该方法成功应用于大黄活性物质的提取工艺优化。第四章应用偏最小二乘法(partial least squares,PLS)建立DPPH自由基清除能力与以RP-HPLC测定的大黄五种蒽醌含量之间的关系模型,对大黄提取物DPPH自由基清除能力进行预测。并且提出以大黄提取物HPLC指纹图谱的色谱图轮廓作为输入,抗氧化活性作为输出,建立中药色谱指纹图谱与抗氧化活性之间的谱效学关系模型,用于中药大黄的抗氧化活性预测,与采用色谱峰面积为分析变量的模型预测结果比较,表明:采用消除干扰后的色谱图全谱轮廓保留了样本的全部信息,预测结果更好。
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