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前言:肺癌是世界上发病率和致死率最高的恶性肿瘤之一。在肺癌中,腺癌的比例在逐年的提高,已经成为主要的病理类型。但腺癌发展快、易转移及复发以及对放化疗的敏感性差等特点导致其预后较差。虽然近年来一些新兴的靶向治疗药物对于肺腺癌的治疗有较大改善,但在应用中仍出现不敏感或耐药等问题。所以探索肺腺癌新的有效靶点,探明致癌的相关机制,对于治疗肺腺癌具有重大意义。越来越多的证据表明,炎症和肿瘤有着密不可分的关系。肿瘤坏死因子受体相关因子相互作用的具有叉形头相关结构域的蛋白(TNF receptor associated factor-interacting protein with a Forkhead-associated domain),缩写为TIFA,是一种含有FHA结构域的蛋白,可以与肿瘤坏死因子受体相关因子相互作用,并参与到下游多条肿瘤相关信号通路中,目前被认为可能是一种炎性因子。目前肿瘤坏死因子受体相关因子已经被证明和癌症相关,而含有FHA结构域的很多蛋白对恶性肿瘤也有调控作用,所以可以推断TIFA有可能也与恶性肿瘤有一定关系。但是在肺癌中,还没有针对TIFA相关的实验。目的:探索TIFA在肺腺癌中的表达并探索其临床意义。在肺腺癌细胞系中,观察TIFA对肺腺癌细胞增殖、细胞周期、凋亡以及侵袭等恶性生物学行为的影响。检测TIFA表达改变后,下游信号通路中蛋白及下游与生物学行为相关的蛋白表达变化,研究TIFA在肺腺癌中促癌的机制。研究方法:1、收集116例于中国医科大学附属第一医院胸外科病房行肺腺癌手术治疗并有完整随访资料的患者,其中男性51例,女性65例。通过免疫组化手段检测TIFA基因在肺腺癌患者癌组织及癌旁组织中的表达,通过卡方检验、单因素分析及多因素分析探讨TIFA基因与肺腺癌患者预后的相关性。使用Kaplan-Meier法比较TIFA表达情况对患者生存期的影响。2、在细胞系实验中,通过Western blot及Real-time PCR手段检测TIFA在不同腺癌细胞系中蛋白及m RNA的表达情况,筛选TIFA高表达的肺腺癌细胞系。在肺腺癌H1975和HCC827细胞系中,通过慢病毒介导的RNA干扰沉默TIFA。通过CCK8法、流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡、侵袭及划痕实验,验证TIFA对肺腺癌细胞生物学行为的影响。3、在肺腺癌H1975和HCC827细胞系中,通过慢病毒介导的过表达或RNA干扰沉默TIFA。使用Western blot检测NF-κB信号通路的激活情况,以及下游与细胞生物学行为相关的p53、Bcl-2、Cleaved Caspase3、p21、Cyclin D1等一些蛋白的变化。结果:1、在临床病例研究中,免疫组化染色证实,116例肺腺癌及癌旁组织中,TIFA在癌组织中的阳性表达63例(54.3%),在癌旁组织的表达35例(30.1%),且差异具有统计学意义。TIFA的表达情况与肺腺癌的分化程度、TNM分期以及生存状态相关。多因素分析显示,TIFA的阳性表达是影响肺腺癌患者生存情况的独立危险因素。Kaplan-Meier生存分析显示,TIFA阳性表达的患者较阴性者的生存期明显缩短。2、在肺腺癌细胞系中,TIFA的表达普遍较正常细胞升高。在肺腺癌H1975和HCC827细胞系中,使用慢病毒介导将TIFA沉默,相比与对照组,CCK8方法检测细胞增殖发现沉默组细胞增殖受到抑制。流式细胞分析检测细胞周期,TIFA沉默后,两组细胞系的G0/G1期比例都较对照组增加,说明沉默TIFA对细胞周期起到了阻滞作用。TIFA沉默组的细胞凋亡比例也明显增加,说明TIFA有调控细胞凋亡的能力。TIFA沉默后,H1975和HCC827细胞的侵袭及迁移能力也较对照组下降,说明TIFA可以对腺癌细胞的侵袭及迁移能力有影响作用。3、在肺腺癌H1975和HCC827细胞系中,使用慢病毒介导将TIFA过表达或沉默。发现在肺腺细胞系中,TIFA可以激活NF-κB信号通路。同时,TIFA表达的变化会引起下游p53、Bcl-2、p21、Cyclin D1等蛋白表达变化,与肺腺癌的恶性生物学行为相关。结论:1、TIFA在肺腺癌组织中呈阳性表达,其表达情况与肺腺癌患者的肿瘤分化程度、TNM分期和肺腺癌患者的生存状态相关。2、TIFA的表达情况可能是影响肺腺癌患者生存情况的独立危险因素。3、在肺腺癌细胞系中,TIFA的表达普遍增高4、TIFA与肺腺癌细胞的增殖及侵袭迁移能力呈正相关,TIFA表达可促进细胞周期进程和抑制细胞凋亡5、TIFA在肺腺癌中通过激活NF-κB信号通路并影响下游蛋白表达来促进肿瘤的恶性生物学行为。