[目的]观察低剂量糖皮质激素和特异性Caspase-3抑制剂单独或者联合早期干预使用,对脓毒症相关急性肾损伤(Sepsis-associated acute kidney injury,SA-AKI)小鼠的肾保护作用,以及其中所涉及的相关作用机制。[方法]选择SPF级雄性C57BL/6小鼠使用盲肠结扎穿孔术(Cecal Ligation and Puncture,CLP)方法构建SA-AKI小鼠模型,共144只随机分成三个时间组(6h、12h、24h),每个时间组再分为六个小组:假手术组;CLP模型组;DMSO有机溶剂对照组;低剂量糖皮质激素(Glucocorticoid,GC)即甲强龙早期干预组(6.4mg/kg);Caspase-3抑制剂早期干预组(4mg/kg);低剂量GC与Caspase-3抑制剂早期联合干预组。所有小鼠术后均行常规液体复苏30mL/kg,于术后30分钟给药。每小组8只小鼠,4只用于取新鲜组织进行蛋白及基因检测,其余4只进行组织切片染色工作。针对SA-AKI小鼠发病过程中的炎症反应和细胞凋亡进行相关检测,首先经苏木素伊红染色法观察肾组织病理学改变进行SA-AKI小鼠肾损伤程度的评分,明确脓毒症小鼠急性肾损伤模型制备情况;炎症反应的相关检测:ELISA法检测SA-AKI小鼠血清中炎性因子IL-1β,Western Blot法测定GR-α蛋白表达,实时相对荧光定量PCR检测中GR-α mRNA、NF-κB mRNA的基因变化,免疫荧光检测SA-AKI小鼠肾组织中的GR-α;细胞凋亡的相关检测:Western Blot法检测肾脏凋亡相关蛋白Cleaved caspase-3及细胞色素c的表达,使用TUNEL法标记SA-AKI小鼠肾组织中的凋亡细胞,免疫荧光检测SA-AKI小鼠肾组织中Cleaved caspase-3蛋白表达的荧光强度变化。[结果]1.SA-AKI小鼠肾组织损伤程度病理学评分及血清BUN含量的检测结果:三个时间段均可见SA-AKI小鼠肾组织损伤病理学评分的增加,并且低剂量GC干预组、Caspase-3抑制剂干预组、联合干预治疗组与CLP模型组和DMSO有机溶剂组之间存在有明显的统计学差异(p<0.05),说明CLP法制备脓毒症模型小鼠可引起明显的肾组织损伤。12h、24h组的低剂量GC组与联合干预治疗组相互间差异有统计学意义(p<0.05)。仅24h组的Caspase-3抑制剂干预组和联合干预治疗组之间有统计学差异(p<0.05)。2.SA-AKI小鼠炎症反应的相关检测:炎性因子IL-1β的检测结果可见,与各自假手术组相比,三个时间段中均可见模型组和有机溶剂组的IL-1β含量逐渐增高;各时间段低剂量GC干预组、Caspase-3抑制剂干预组、联合干预治疗组相比于其各自CLP模型组,IL-1β含量明显降低,差异有统计学意义(p<0.05)。糖皮质激素受体蛋白及基因的检测结果可见,与其各自假手术组相比,6h和12h模型组及24h Caspase-3抑制剂组GR-α蛋白的表达明显降低,三个时间段模型组、有机溶剂DMSO组、低剂量GC组以及12h、24h Caspase-3抑制剂组、24h联合干预治疗组GR-α mRNA基因表达也显著降低;与不同时间段各模型组相比较,所有低剂量GC组、6h和12h联合干预治疗组GR-α表达明显升高,6h、24h的Caspase-3抑制剂组较低剂量GC组表达降低,且与联合干预治疗组比较表达升高均有统计学意义(p<0.05)。6h低剂量GC组以及6h、12h联合干预治疗组与各自模型组、Caspase-3抑制剂组相比较可见GR-α mRNA基因表达明显升高。仅12h联合干预治疗组与低剂量GC组相比较GR-α mRNA基因表达升高有明显差异,且有统计学意义(p<0.05)。SA-AKI小鼠肾组织NF-κB mRNA基因含量的检测结果可见,与其各自假手术组相比,各时间段模型组、6h及12h有机溶剂组、12h Caspase-3抑制剂组NF-κB mRNA基因表达升高有明显差异;与其各自模型组相比较,各时间段低剂量GC组与联合干预治疗组、6h和12h的Caspase-3抑制剂组的NF-κB mRNA基因表达明显降低且有统计学意义(p<0.05),说明两种早期干预药物均起到一定抑制NF-κB mRNA表达的作用,且联合干预组的作用最为显著。3.SA-AKI小鼠细胞凋亡的相关检测:SA-AKI小鼠肾组织细胞色素c蛋白表达的检测结果可见,与各自假手术组比较,6h模型组及24h有机溶剂组Cytc表达明显升高;与其模型组相比较,6h和12h低剂量GC组、Caspase-3抑制剂组及联合干预治疗组Cytc表达显著降低,且差异有统计学意义(p<0.05)。SA-AKI小鼠肾组织Cleaved caspase-3蛋白表达结果可见,三个时间段模型组、6h和12h有机溶剂DMSO组与其各自假手术组比较Cleaved caspase-3表达明显升高,有显著的细胞凋亡的发生;与各自模型组相比较,6h和12h低剂量GC组、12h Caspase-3抑制剂组以及各时间段联合干预治疗组Cleaved caspase-3表达降低差异有统计学意义(p<0.05),证明早期干预措施能够在一定程度上抑制Caspase-3蛋白的激活,从而减轻细胞凋亡的发生。[结论]1.低剂量糖皮质激素早期干预通过增加SA-AKI小鼠肾组织GR的表达而减轻炎症反应,从而发挥肾保护作用;还通过抑制NF-κB的基因表达而发挥一定抑制细胞凋亡的作用。2.Caspase-3抑制剂通过直接抑制Caspase-3的蛋白表达,并且降低线粒体相关细胞凋亡途径中的细胞色素c的释放,从而一定程度减轻SA-AKI小鼠的细胞凋亡。3.与单独使用时相比,低剂量糖皮质激素与Caspase-3抑制剂联合使用早期干预时,对炎症反应及细胞凋亡的抑制作用更为明显,提高了对SA-AKI小鼠的肾保护作用。