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胎膜早破(premature rupture of membrane,PROM)指孕妇胎膜于临产前发生自发性破裂,目前可以据破膜发生时的孕周将胎膜早破分为足月胎膜早破(term premature rupture of membrane,TPROM)和未足月胎膜早破(preterm premature rupture of membrane,PPROM)。PROM约占妊娠的10%,80%~90%的PROM在24h内自然临产,90%的PPROM在7天内临产[1]。PROM可致早产率升高,宫内感染率升高,围生儿病死率增加,产褥感染率升高[2],是围生期最常见的并发症[3]。PROM的病因有许多,但是其基本的病理变化是炎症、应激反应以及细胞凋亡等,胎盘胎膜处的这些反应不仅可以弱化胎膜结构,也可激活孕妇的免疫系统,引起胎膜破裂。本课题组前期已完成对PPROM和正常足月妊娠患者胎盘组织总蛋白质的分离,并用MALDI-TOF/TOF-MS鉴定出16个差异表达的蛋白质[4],我们选择其中的蛋白质二硫键异构酶(protein disulfide isomerase,PDI)作为研究对象,PDI是一种主要位于哺乳动物内质网中的巯基-二硫键氧化还原酶,属折叠酶[5]。这种蛋白在蛋白质转运、钙稳态、蛋白质降解途径、抗原呈递、病毒入侵、精子卵子融合、免疫和损伤应激、信号调控、癌变等方面起重要作用[6]。PDIA3又称ERp57,是该家族中巯基蛋白氧化还原酶的重要组分,属内质网应激信号通道蛋白,能催化形成二硫键,具有分子伴侣活性。本实验通过检测PDIA3在胎膜早破患者胎盘以及胎膜组织中的表达,探讨其在胎膜早破发病机制中发挥的作用,可能为预防及检测PROM的发病提供新的方向。目的本课题通过研究pdia3mrna及其蛋白在pprom组,tprom组,正常足月妊娠组和早产组胎盘胎膜组织中的表达与定位,探讨pdia3在胎膜早破发生、发展过程中的作用机制。材料和方法1.研究对象收取2013年9月至2014年9月,至河南省妇幼保健院经剖宫产分娩的tprom患者、pprom患者各30例作为实验组。同时随机抽取同时期入院经剖宫产分娩的正常足月产、因计划外妊娠行中孕引产者各30例作为对照组。2.方法(1)运用免疫组织化学sp法对以上各组胎盘和胎膜组织中的pdia3蛋白的表达进行定位和半定量检测。(2)运用实时荧光定量pcr(rt-pcr)法对以上各组胎盘和胎膜组织中的pdia3mrna的表达进行检测。3.统计学处理所有数据均采用spss20.0软件进行统计学分析。记量资料用sx±表示,两组组间符合正态分布的计量数据采用两独立样本t检验,不符合正态分布的计量数据采用mannwhitneyu检验。计数资料用率表示,两组间比较采用卡方检验。以α=0.05为检验水准。结果1.实验组和对照组患者一般临床情况的数据比较tprom组、pprom组、早产组、正常足月妊娠组产妇平均年龄分别为27.1士3.7岁、27.0士4.4岁、26.3士2.9岁、26.6士4.1岁。孕周分别为38.6±1.9周、30.2±1.3周、29.5±1.7周、38.9±1.4周。四组孕妇年龄比较差异无统计学意义(p>0.05);正常足月妊娠组与tprom组孕周比较,差异无统计学意义(p>0.05);早产组与pprom组孕周比较,差异无统计学意义(p>0.05)。2.实验组和对照组胎盘组织中pdia3蛋白的定位和表达在胎盘组织中,pdia3蛋白主要表达于细胞质,经sp染色呈黄色颗粒状,pdia3蛋白在tprom组、pprom组、早产组、正常足月妊娠组胎盘组织中的阳性率分别为93.33%、90.00%、43.33%、60.00%,tprom组与正常足月妊娠组相比,pdia3蛋白的表达量明显升高,差异具有统计学意义(p<0.05);pprom组与早产组相比,pdia3蛋白的表达量明显升高,差异具有统计学意义(p<0.05)。3.实验组和对照组胎膜组织中pdia3蛋白的定位和表达在胎膜组织中,pdia3蛋白主要表达于细胞质,少量位于细胞核和细胞膜,经sp染色呈黄色颗粒状,pdia3蛋白在tprom组、pprom组、早产组、正常足月妊娠组胎膜组织中的阳性率分别为86.67%、83.33%、46.67%、50.00%,tprom组与正常足月妊娠组相比,pdia3蛋白的表达量明显升高,差异具有统计学意义(p<0.05);pprom组与早产组相比,pdia3蛋白的表达量明显升高,差异具有统计学意义(p<0.05)。4.实验组和对照组胎盘组织中pdia3mrna的表达在胎盘组织中,pdia3mrna在tprom组、pprom组、早产组、正常足月妊娠组中的相对表达量分别是:2.025±0.180、2.012±0.188、0.995±0.278、0.958±0.418。tprom组与正常足月妊娠组相比,pdia3mrna的表达量明显升高,差异具有统计学意义(p<0.05);pprom组与早产组相比,pdia3mrna的表达量明显升高,差异具有统计学意义(p<0.05)。5.实验组和对照组胎膜组织中pdia3mrna的表达在胎膜组织中,pdia3mrna在tprom组、pprom组、早产组、正常足月妊娠组中的相对表达量分别是:1.440±0.053、1.452±0.056、1.035±0.035、1.024±0.049。tprom组与正常足月妊娠组相比,pdia3mrna的表达量明显升高,差异具有统计学意义(p<0.05);pprom组与早产组相比,pdia3mrna的表达量明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论PDIA3蛋白和mRNA在胎膜早破患者胎盘以及胎膜组织中的表达量升高,PDIA3可能通过多种途径参与胎膜早破的发生、发展,是胎膜早破的一种可能的生物标记物。