目的:抗体药物是重要的肿瘤分子靶向药物,运用纳米抗体策略研究新靶点治疗性药物已是抗体药物研发新趋势之一。FGF-2/FGFR作为抗肿瘤治疗的靶点之一,目前尚未有商品化的治疗性FGF-2抗体,FGF-2靶向药物的研发仍有广阔空间。本研究以FGF-2为靶点,免疫羊驼,噬菌体展示技术筛选抗FGF-2纳米抗体,以血管内皮细胞、黑色素瘤细胞、鸡胚尿囊膜、荷瘤小鼠等为模型,旨在开发出在体内外具有抗血管新生及抗肿瘤活性的FGF-2纳米抗体候选药物。方法和结果:以FGF-2免疫羊驼,采用噬菌体展示技术构建了库容为1×1014 pfu/m L的FGF-2纳米抗体噬菌体库,通过三轮淘洗和噬菌体ELISA法筛选,获得了6个氨基酸序列上存在差异的FGF-2纳米抗体。将FGF-2纳米抗体克隆至p NCS表达载体,经大肠杆菌DH5α表达和Ni-NTA亲和层析柱纯化,RP-HPLC法证明纯化后的NbFGF-2纯度在90%～95%。采用生物信息学方法分析NbFGF-2理化特性,发现它们分子量在17.5-18.6 k Da之间;理论等电点均低于7,在生理环境中带负电荷;GRAVY均为负值,为亲水性蛋白质。ELISA方法研究NbFGF-2特性发现,NbFGF-2与FGF-2结合特异性强、亲和力高（n M）、热稳定性好,其中Nb1、Nb2、Nb3、Nb5和Nb6与FGF-2 m Ab同FGF-2的结合表位相近或者相似;Nb1、Nb3、Nb5和Nb6与FGFR2同FGF-2的结合表位相近或者相似。在NbFGF-2抑制血管生成及生长研究中,CCK-8法验证了Nb1、Nb2、Nb3、Nb5和Nb6呈剂量依赖关系抑制HUVECs细胞的增殖,最高抑制率在29%～43%。鸡胚尿囊膜实验证明了Nb FGF-2可减少鸡胚尿囊膜的血管面积（**p<0.01）,其中当Nb6浓度为4 nmol/L时,鸡胚血管抑制率最高可达到52.7%。在黑色素瘤细胞模型中,CCK-8法验证了Nb1、Nb2、Nb3、Nb5和Nb6对小鼠黑色素瘤细胞B16、B16-F10和人黑色素瘤细胞A375的最高抑制率分别为25%～46%、31%～43%和24%～36%。划痕实验发现最佳候选药物Nb6能显著抑制黑色素瘤细胞的生长及迁移,且呈剂量依赖关系（**p<0.01）。Western Blotting实验检测黑色素瘤胞内信号通路,发现Nb6在0.5h可呈剂量依赖关系抑制胞内Erk1/2和Akt磷酸化水平,进而抑制细胞的增殖和迁移。建立小鼠中期黑色素瘤模型,通过测量小鼠瘤体湿重可知,当Nb6浓度为20 mg/kg时,它的抑瘤率为40.52%。HE染色发现Nb6给药处理后瘤体组织细胞发生了核溶解现象。免疫组化检测发现Nb6可抑制瘤体组织内FGF-2的表达和微血管的生成（**p<0.01）。Western Blotting实验检测瘤体胞内信号,发现Nb6可抑制p-Erk1/2和Bcl-2表达,促进Caspase-9表达。在NbFGF-2与顺铂联用治疗小鼠早期黑色素瘤研究中,20 mg/kg Nb6的抑瘤率为72.24%（**p<0.01）,相比中期治疗时的抑瘤效果更佳。但Nb6与顺铂联用时抑瘤率为83.17%（**p<0.01）,与Nb6单用时无显著差异。结论:本研究以FGF-2免疫羊驼,构建了FGF-2纳米抗体噬菌体库。从中筛选获得了6株具有分子量小、特异性强、亲和力高、热稳定性好等特点的NbFGF-2。对它们进行体内外活性研究发现,NbFGF-2不仅可以抑制HUVECs细胞增殖和鸡胚尿囊膜的血管生成,还可以抑制黑色素瘤细胞的增殖、生长及迁移。比较Nb6对小鼠中期和早期黑色素瘤的抑制活性,发现同等剂量Nb6对肿瘤早期治疗效果更显著,此外,Nb6与顺铂联用无增效作用。