【摘 要】
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目的: 1.探讨补肾中药(骨灵丸)血清的最优提取方法; 2.观察补肾中药血清对体外培养破骨细胞骨吸收功能的影响; 3.探讨补肾中药血清对破骨细胞RANK基因表达水平的影
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目的: 1.探讨补肾中药(骨灵丸)血清的最优提取方法; 2.观察补肾中药血清对体外培养破骨细胞骨吸收功能的影响; 3.探讨补肾中药血清对破骨细胞RANK基因表达水平的影响; 4.探讨补肾中药对成骨—破骨细胞共育体系中护骨素/护骨素配体的蛋白及基因表达水平的影响及与破骨细胞活性的相关性。 方法: 1.按处方配制补肾中药,传统方法熬煮中药,水浴锅浓缩至252ml,SD大鼠36只随机分成空白组(生理盐水2m1)、低剂量组(生药1.77g/次)、中剂量组(生药3.54g/次)、高剂量组(生药7.08 g/次),每日早晚2次灌胃,共3天,第4日末次灌胃后1小时采血,离心,吸取血清,大部分血清56℃,30分钟灭活保存,部分用于干预成骨细胞试验;取SD胎鼠的头盖骨分离培养获得纯化的成骨细胞,使用MTT比色分析方法在酶标仪上测试灭活前后血清干预的成骨细胞增殖情况,记录每组A570值;对硝基苯磷酸盐法(PNPP)测各组碱性磷酸酶活性,使用SPSS10.0软件包的配对T检验比较灭活前后血清对成骨细胞生物学作用的差别; 2.取SD大鼠的胎鼠四肢骨分离培养破骨细胞(OC),差异贴壁法获得纯度在95%以上的破骨细胞,分成低、中、高、空白对照四组,每组6孔,施加相应浓度的补肾中药血清,对照组采用无中药血清,培养24小时,酶动力学法测定培养上清中抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)的活性,甲苯胺蓝染色骨吸收陷窝并在图像分析仪
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