背景与目的肺癌(lung cancer)是当今世界上发病率和死亡率最高的肿瘤,其是世界范围内主要的公共卫生问题。2012年全世界的肺癌新发病率男性中约为124.2万,死亡病例109.9万,女性中约为58.3万,死亡病例为49.1万,居世界恶性肿瘤发病及死亡之首,在男性肿瘤发病率中居第一位,女性恶性肿瘤发病率中居第四位。目前非小细胞肺癌的治疗方法主要有化疗、放疗和手术治疗,但是由于早期肺癌患者并没有明显的临床症状,当患者被确诊时,大约只有15%的患者能够通过早期检查发现并接受手术治疗,大多数患者发现时已经属于中晚期,失去了最佳手术和治疗机会,只能接受全身化疗,因此肺癌患者的预后较差,化疗成为了治疗晚期肺癌的主要方式。然而目前的化疗方案并没有取得很好的治疗效果,化疗仅能使5%-15%明显受益。现在对NSCLC治疗提倡个体化治疗。所谓个体化治疗是根据肿瘤生物学和药物基因组学的改变进行针对性治疗。谷胱甘肽S转移酶(GSTs)是一组有多种生理功能的药物代谢酶,属于II相代谢酶,GSTs主要包括GSTA、GSTM、GSTT、GSTP4个家族。它们可以催化极性化合物与谷胱甘肽(G lutahione, GSH)结合,防止极性化合物对于DNA的损伤,并可与亲脂性细胞毒药物、染料致癌物等结合使其更易溶于水进而从体内排出而达到降低毒性作用的目的。其有可以保护细胞DNA的完整性以及促进损伤DNA修复的作用。由于GSTs的基因多态性可影响相应的酶分子结构、功能和表达水平的改变,从而影响细胞的解毒能力,因此被认为与肿瘤易感性和患者对化疗药物的敏感性有关。目前对于GSTs多态性的研究比较多的集中在其与肺癌等肿瘤易感性的研究上,与化疗药物的关系上研究比较少。铂类药物发挥抗癌作用的主要靶点为DNA分子,当铂类药物进入细胞后,与肿瘤细胞内DNA双链结合,形成Pt-DNA加合物,导致DNA发生损伤,进而使DNA复制、转录功能障碍,从而导致肿瘤细胞死亡,达到抗肿瘤目的。DNA损伤修复至少存在5种途径：核苷酸切除修复途径(nucleotide excision repair, NER)、错配修复途径(mismatche repair, MMR)、碱基切除修复途径(bace excision repair, BER)和双链断裂修复(DNA double strand break repair, DDSBR)以及非同源末端连接(nonhomologous end joining, NHEJ)。作为活跃的DNA损伤修复途径,BER催化的底物范围广泛,BER修复功能异常与抗肿瘤药物耐药关系密切。XRCC1基因位于染色体19q13.2-13.3上,XRCC1是碱基切除修复系统BER中的重要成分。XRCC1基因编码区如果存在可以导致氨基酸发生改变的单核苷酸多态性,则会影响XRCC1的活性。XRCC1中有多种单核苷酸多态性存在,最常见的是第10位外显子,Arg399Gln (28152Arg→Gln);第9位外显子,Arg280His (27466 Arg→His);第6为外显子,Arg194Trp (26304Arg→Trp).对癌症患者个体而言,XRCC1的基因多态性就能够改变蛋白的活性,影响其修复功能,当修复功能增强时,对铂类等化疗药物产生耐药,而当活性降低,DNA修复功能减弱,对化疗药物敏感性增强。本研究旨在探讨GSTM1、GSTT1和GSTP1 11e105Val以及XRCC1 Arg399Gln, Arg280His和Arg194Trp基因多态性与非小细胞肺癌晚期铂类药物化疗效果的关系,主要从化疗敏感性以及生存期等方面进行研究。材料与方法以我医院收治的2009年7月-2012年7月收治的经病理学确诊的符合入选条件的156例晚期非小细胞肺癌晚期患者作为研究对象。在化疗前采用EDTA-Na2抗凝管抽取病例组以及对照组研究对象静脉血5m1,放置于-80℃冰箱中保存备用。根据SNP位点通过Sequenom公司的Assay Design3.1软件进行引物设计。提取基因组DNA进行PCR扩增后,采用PCR仪收集荧光信号,根据荧光信号绘制出GSTM1、GSTT1缺失或者存在,测序GSTP1 lle105Val位点的基因型、XCRR1 Arg194Trp、Arg280His和Arg399Gln的基因型。对患者进行以顺铂为基础的化疗,根据RECIST标准,将完全缓解和部分缓解的患者判定为化疗敏感组；部分稳定和进展归于化疗不敏感或耐药组。对非小细胞肺癌患者进行每月一次的随访,所有患者随访2014年7月。统计患者的化疗敏感情况和生存时间,以及GSTM1、 GSTT1、GSTP1 lle105Va1、XRCC1 Arg194Trp、Arg280His和Arg399Gln基因多态性与患者生存期的关系。采用SPSS 19.0(version 19.0, SPSS Inc., Chicago, IL,USA)进行统计分析。结果对GSTP1 11e105Val基因Ue105Val位点进行Hardy-Weinberg检验,GSTP1基因符合Hardy-Weinberg遗传平衡规律(P=0.790)。GSTM1缺失与否并不影响化疗的结果(OR=I.60,OR95%CI-0.83-3.09,P=0.160)。GSTT1基因基因的缺失与否也不影响化疗的结果(OR=I.44,OR95%CI.0.73-2.85,P=0.290)。携带GSTP1 11e105Val Val/Val基因型的患者,与携带11e/Ⅱe型基因患者相比,其治疗有效性增加6.39倍(OR=6.39,OR95%CI.1.61-25.35,P=0.008)。当患者携带GSTP1 11e105Val Ⅱe/Val+Val/Val基因型时,无吸烟史的患者化疗效果优于IIe/IIe型5.56倍(OR=5.56,OR95%CI=1.39-24.25,P<0.001)。而当患者携带Ⅱe/Val+Val/Val基因型时,Ⅳ分期的患者化疗效果优于Ⅱe/Ⅱe型3.10倍(OR=3.10,OR95%CI=1.19-8.16,P=0.013)。而当患者携带IIe/Val+Val/Val基因型时,病理分型为鳞癌的患者与携带IIe/IIe型相比,治疗效果优于IIe/IIe型2.92倍(OR=2.92,OR95%CI=1.12-7.70,P=0.021)。携带Ⅱe/Val+Val/Va1基因型的患者,采用顺铂+多西他塞方案的患者化疗效果要比携带IIe/IIe型患者高4.05倍(OR=4.05,OR95%CI=1.06-17.10,P=0.022)。携带Ⅱe/Val+Val/Val?基因型患者,采用顺铂+长春瑞滨的患者化疗敏感性要优于携带Ⅱe/Ⅱe型患者3.72倍(OR=3.72,OR95%CI=0.96-17.10)。GSTP1 11e105Va1 Ⅱe/Val基因型与生存时间明显相关,携带IIe/Val基因型的非小细胞肺癌患者死亡风险较低(HR=0.36,95%CI：0.11-0.98,P=0.030)。GSTM1和GSTT1基因的存在与缺失与化疗敏感性和生存时间差异无统计学意义。对XRCC1基因Arg194Trp, Arg280His, Arg399Gln位点分别进行Hardy-Weinberg检验,XRCC1 Arg280His基因不符合Hardy-Weinberg遗传平衡规律(P=0.004),XRCClArg194Trp、Arg399Gln符合Hardy-Weinberg遗传平衡规律(P=0.48,P=0.13)。携带XRCClArg399Gln AA型基因非小细胞肺癌患者化疗效果是携带GG基因型的3.69倍(OR=3.69,95%CI=1.34-10.17,P=0.01)。而携带GA基因型的非小细胞肺癌患者与GG基因型相比,化疗效果无统计学差异(OR=2.54,95%CI=0.92-7.01,P=0.07)。有吸烟史的患者携带XRCClArg399Gln GA+AA基因型时,其化疗效果优于携带GG型2.56倍(OR=2.56,OR95%CI=1.06-7.70,P=0.02)。携带XRCCl Arg399Gln GA+AA基因型的TNM分期为IIIB期的患者,其化疗效果是GG型的3.07倍(OR=3.07,OR95%CI=0.97-10.07,P=0.03)。XRCCl Arg194Trp, Arg280His和Arg399Gln基因多态性与非小细胞肺癌患者生存时间无相关关系,差异无统计学意义(P>0.05)。采用Cox风险比例模型分析,XRCCl Arg194Trp, Arg280His和Arg399G1n基因多态性与非小细胞肺癌死亡风险无相关关系,差异无统计学意义(P>0.05)。采用Logistic回归模型分析发现,非小细胞肺癌患者同时携带GSTP111e105Val Ⅱe/Val+Val/Val和XRCClArg399G1n G/A+A/A基因型化疗敏感性是同时携带GSTP1 11e105Val Ⅱe/Ⅱe和XRCC1 GG基因型的4.17倍(OR=4.17,OR95%CI：1.46-12.32,P=0.003)。采用Cox风险比例模型分析发现,GSTP1 11e105Val和XRCC1 Arg399Gln基因多态性与非小细胞肺癌患者死亡风险差异无统计学意义(P>0.05)。结论GSTM1缺失与否与非小细胞肺癌晚期铂类药物化疗效果、与患者生存时间无显著性相关关系。GSTT1缺失与否与非小细胞肺癌晚期铂类药物化疗效果效果、与患者生存时间无显著性相关关系。当晚期非小细胞肺癌患者GSTP1 11e105Val基因携带Val/Val基因型时,铂类药物化疗效果效果较Val/Val基因型好,患者生存时间更长。该结果表示者GSTP1 11e105Val基因多态性能增强非小细胞肺癌患者化疗的疗效。XRCClArg399Gln携带AA型基因非小细胞肺癌患者化疗效果是携带GG基因型的3.69倍。XRCC1 Arg399Gln GA+AA基因型与吸烟和TNM分期对非小细胞肺癌化疗的敏感性有交互作用。非小细胞肺癌患者同时携带GSTP1 11e105Val Ⅱe/Val+Val/Val和XRCCl Arg399Gln G/A+A/A基因型能显著性增加患非小细胞肺癌化疗的敏感性。而研究未发现XRCC1 Arg280His和XRCC1 Arg194Trp基因多态性与非小细胞肺癌晚期铂类药物化疗敏感性。XRCC1 Arg194Trp, Arg280His和Arg399Gln基因多态性与非小细胞肺癌患者死亡风险差异无统计学意义。