应用RT-PCR技术检测血管内皮细胞生长因子受体KDR在肝癌细胞系HHCC、HepG2、Hep-6及正常肝细胞L-02的表达,筛选出KDR高表达肝癌细胞株HHCC。设计构建针对KDR的siRNA,通过脂质体转染肝癌细胞HHCC观察其干扰效果。设计针对KDR编码区的有短发夹结构的三条DNA序列,经退火成互补双链,克隆到pGCsi.H1/neo/GFP载体中构建三个重组质粒,分别命名为KDR-siRNA1、KDR-siRNA2和KDR-siRNA3;对重组质粒进行酶切鉴定、DNA测序分析;脂质体法转染质粒至肝癌HHCC细胞株后,实时定量PCR检测KDR mRNA的水平变化;绘制细胞生长曲线。结果表明:KDR-siRNA表达载体用限制性内切酶NdeI和SmaI进行单酶切后分别产生约632bp、5480 bp和2403 bp、3709 bp两个片段;测序结果与设计的KDR-siRNA的寡核甘酸序列一致;三个KDR-siRNA转染后KDR的表达明显受到抑制, KDR-siRNA2抑制作用最为明显,抑制率分别为:68.8%、82.6%和64.4%;转染阳性、阴性和空白对照组的HHCC细胞和未转染组的HHCC细胞生长趋势较为一致,生长速度明显高于转染组。从接种第2天开始,KDR-siRNA转染组的细胞数与对照组差异有统计学意义(P<0.01)。结论:KDR靶向RNA干扰重组体质粒构建成功,该载体能有效抑制肝癌HHCC细胞KDR基因表达,抑制细胞增殖,为探索KDR介导的肿瘤基因治疗的新途径奠定了实验基础。