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传统培养方法一直是鉴定临床常见病原菌的“金标准”。其主要包括细菌富集、接种分离和一系列生化反应进行鉴定,但其耗时长,操作复杂,阳性率低,不能满足临床大规模的检测。根据目前国内大型医院病原菌感染种类,革兰阴性菌和革兰阳性菌占有大部分的比例,其次为一些常见真菌感染占血流感染的小部分比例。在细菌感染中,大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌占绝大多数,近些年来,肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌和肠球菌感染的比例也在逐年上升,铜绿假单胞菌,肺炎链球菌,变形杆菌等细菌占有小部分比例。本课题应用多重聚合酶链式反应技术,针对以上临床常见感染细菌建立肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、肺炎链球菌、屎肠球菌、粪肠球菌、大肠埃希菌、表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、奇异变形杆菌等10种临床常见病原菌的快速、高效检测方法,并用于培养后病原菌的检测。在美国国家生物技术信息中心(NCBI)上查找10种病原菌的毒力因子序列,选取每种菌具有特异性的基因序列,本课题选取肺炎克雷伯菌khe基因、鲍曼不动杆菌OXA基因、肺炎链球菌Lyt A基因、屎肠球菌和粪肠球菌ddl基因、大肠埃希菌pho A基因和O83H1基因、表皮葡萄球菌2312基因和gse A基因、金黄色葡萄球菌nuc基因、铜绿假单胞菌ecf X基因和奇异变形杆菌ure基因序列,在这些细菌序列的保守区用primer 5.0软件进行引物设计,将细菌的每条引物的Tm值设计在相同温度,并将细菌扩增片段设计成相差50bp左右,以此用来建立5重PCR体系和8重PCR扩增体系分别对血培养物和体液培养物进行检测。收集临床血培养和体液培养阳性标本500例,应用多重PCR进行检测,并与传统培养方法鉴定结果进行比较。所建立方法可扩增出特异性病原菌目标DNA条带,且条带清晰、亮度一致,无非特异性杂带出现。500例体液和血液培养报阳样本应用多重PCR体系目标菌检出率为71.2%(356例/500例),其中单重细菌感染310例,混合感染46例,传统培养法目标菌检出率为70.2%(351例/500例),其中单重细菌感染318例,混合感染33例,其余报阳样本多为真菌感染,其次为一些细菌,例如人葡萄球菌、阴沟肠杆菌、溶血葡萄球菌、摩式摩根菌感染。多重PCR方法与传统鉴定方法相比,可大幅度缩短临床培养瓶报阳后鉴定时间,大幅度的提高临床血培养检测效率,而且其在混合细菌感染检测方面的优势,具有良好的临床应用前景。