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研究目的:(1)探讨小鼠胸腺内注射异基因抗原在同种异体异基因坐骨神经移植免疫耐受中的作用;(2)比较不同直径的新鲜自体神经和冷冻异体神经移植的效果,探讨神经直径对神经移植效果的影响。研究技术路线:第一部分:小鼠胸腺内注射异基因抗原在同种异体坐骨神经移植免疫耐受中的作用1、动物分组:48只Balb/c小鼠随机分为4组,A组(胸腺内注射组);B组(自体神经移植组);C组(冷冻异体神经移植组);D组(异体神经移植加用免疫抑制剂组)。2、自供体小鼠C57BL/6的脾细胞中提取MHC抗原注入受体鼠Balb/c小鼠胸腺内,于2周后移植供体鼠坐骨神经。3、各实验组于3周后分别进行电生理学、电镜、免疫学检测。第二部分:(一)不同直径新鲜自体神经移植效果的比较研究1、将40只SD大鼠均造成右侧坐骨神经缺损模型,随机分成A、B、C、D组。每只鼠右侧用新鲜自体神经移植。A组:坐骨神经——坐骨神经(直径比1:1);B组:桡神经——坐骨神经(直径比0.8:1);C组:正中神经——坐骨神经(直径比0.6:1);D组:尺神经——坐骨神经(直径比0.5:1);2、各组于术后4周、6周分别进行运动神经传导速度、组织学检查。(二)不同直径冷冻异体神经移植效果的比较研究1、将40只SD大鼠均造成右侧坐骨神经缺损模型,随机分成E、F、G、H组,分别用不同直径的冷冻异体神经段移植修复缺损,每只鼠右侧用冷冻异体神经移植,E组:坐骨神经——坐骨神经(直径比1:1);F组:桡神经——坐骨神经(直径比0.8:1);G组:正中神经——坐骨神经(直径比0.6:1);H组:尺神经——坐骨神经(直径比0.5:1)。2、各组分别于术后4周、6周进行运动神经传导速度、组织学检查。研究结果:第一部分:小鼠胸腺内注射异基因抗原在同种异体坐骨神经移植免疫耐受中的作用1、A组运动神经传导速度为38.23~m/s与D组36.39~m/s相比较无显著性差异p>0.05。2、组织学、电镜、免疫学检测结果均证实B组分别优于A组、D组、C组。第二部分:(一)不同直径新鲜自体神经移植效果的比较研究1、自体神经移植术后4周,各组间运动神经传导速度均无显著性差异p>0.05。2、自体神经移植术后6周,各组间运动神经传导速度均无显著性差异p>0.05。3、自体神经移植4周时,近端轴突排列整齐,髓鞘完整,中段可见新生神经纤维成簇分布,少量淋巴细胞浸润,远端神经束排列整齐,再生轴突少。6周时轴突增粗,可见少量淋巴细胞浸润,远端再生神经纤维较前明显增多。(二)不同直径冷冻异体神经移植效果的比较研究1、异体神经移植各组术后4周,各组间有显著性差异p<0.05,其中坐骨神经组最好,尺神经组最差。2、异体神经移植各组术后6周,各组间有显著性差异p<0.05,其中尺神经组最好、坐骨神经组最差。3、异体神经移植4周时,神经近端有少量淋巴细胞浸润,中段可见较多的空管结构,新生神经纤维轴突纤细,远端可见极少再生轴突。6周时轴突增粗,但较自体组明显差,仍有较多淋巴细胞浸润。研究结论:第一部分:小鼠胸腺内注射异基因抗原在同种异体坐骨神经移植免疫耐受中的作用胸腺内注射异基因MHC抗原可诱导异体坐骨神经移植的特异性免疫耐受。第二部分:1、神经的直径和移植效果之间存在着密切关系,新鲜自体神经移植时,移植神经段的直径只要达到缺损神经干的1/2以上,即可产生与等直径神经移植相接近的效果。2、冷冻异体神经移植中,术后4周直径粗的神经比直径细的神经移植效果好,术后6周直径细的神经比直径粗的神经移植效果好。