【摘 要】
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细胞色素c是呼吸电子传递链的主要成员之一.负责将电子从细胞色素b传递到细胞色素c氧化酶.在细胞的能量产生过程中具有重要地位.我们起初意图从人胎儿心肌组织中通过RT-PCR的
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细胞色素c是呼吸电子传递链的主要成员之一.负责将电子从细胞色素b传递到细胞色素c氧化酶.在细胞的能量产生过程中具有重要地位.我们起初意图从人胎儿心肌组织中通过RT-PCR的方法得到人细胞色素c基因的编码序列,结果得到的HCP1和HCP2基因片段被证明为是人细胞色素c的两条假基因;HCP11和HCP27.随后以基因组DNA为模板,通过PCR的方法,得到precyt c基因(有1个内含子),剔除内含子后,得到细胞色素c基因的编码序列.测序结果表明,该基因与GenBank中报道的人细胞色素c基因碱基顺序完全一致.将其插入原核表达载体pET〈,3a〉的Nde I和HindIII位点之间构建pET〈,3a〉-cyt c重组质粒,并成功转入E.COLI BL21(DE3)中经IPTG诱导表化后,15％SDS-PAGE分析,可观察到1条与细胞色素c蛋白分子量相符的电泳条带,Western印记结果显示,该条带与小鼠抗人cyt c单克隆抗体IgG〈,2b〉发生特异反应,证实为人细胞色素c的前体蛋白.在CCHL(细胞色素c血红素裂解酶)催化下于体外使血红素与该前体蛋白结合生成完整的人细胞色素c蛋白,其耗氧量在不同浓度具有反应时间的线性关系.在研究为探讨人细胞色素c蛋白的构效关系、电子传递机理、生物合成过程、跨膜转运机制及细胞色素c血红素裂解酶的结构功能关系建立了技术平台.为细胞色素c基因的分子进行研究提供了新的数据.为细胞色素c诱导细胞凋亡的机理及其与衰老的关系等课题研究建立了一个良好的开端.为工业化生产人源细胞色素c蛋白奠定了基础.
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