【摘 要】
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本论文共包括4章 第一章首先对杆状病毒的研究历史作了综述性报道,包括病毒的分类学研究,病毒结构和感染循环等。对棉铃虫单核衣壳核多角体病毒(HaSNPV)的研究历史和近期对HaSNPV的基因组学研究以及本论文的研究内容作了简要介绍。 第二章对HaSNPV基因组中的HindⅢ-Ⅰ片段的序列进行分析,该片段全长7501bp,包括十个开放阅读框:AcMNPV ORF111的同源基因(Ac111
【机 构】
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中国科学院研究生院(武汉病毒研究所)
【出 处】
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中国科学院大学(中国科学院武汉病毒研究所)
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本论文共包括4章 第一章首先对杆状病毒的研究历史作了综述性报道,包括病毒的分类学研究,病毒结构和感染循环等。对棉铃虫单核衣壳核多角体病毒(HaSNPV)的研究历史和近期对HaSNPV的基因组学研究以及本论文的研究内容作了简要介绍。 第二章对HaSNPV基因组中的HindⅢ-Ⅰ片段的序列进行分析,该片段全长7501bp,包括十个开放阅读框:AcMNPV ORF111的同源基因(Ac111),晚期表达因子2(lef-2)基因,病毒核壳结构蛋白p24基因,gp16基因,多角体包膜蛋白(poiyhedrin envelope protein,pep)基因,AcMNPVORF63的同源基因(Ac63),38.7kd基因,晚期表达因子1(lef-1)基因,及两个特有基因HaSNPV orf591(Ha122)和HaSNPV orf435(Ha125)。基因组的排列比较分析发现与AcMNPV有较大区别。 HaSNPV基因组中含有20个独特开放阅读框架。第三章对HaSNPV中独特基因Ha122进行了深入的分子生物学分析。转录时相显示Ha122从感染后8小时开始转录成一个添加多聚A尾的转录产物,一直延续到感染后72小时。5’RACE(Rapid Amplification of cDNA End)分析结果表明Ha122基因的转录主要从翻译起始密码子上游第47个碱基起始,该处有一个晚期转录信号TAAG。3’RACE分析结果表明转录的终止位点在翻译终止密码子下游的27个碱基处。用原核表达的蛋白免疫鸡,得到特异性的鸡源多克隆抗体。Western blot结果显示HSNPV感染的细胞中有HA122蛋白,分子量为21kDa。将Ha122与绿色荧光蛋白(GFP)基因融合,在昆虫细胞中瞬时表达。当有病毒感染同时发生时,GFP信号定位在核内。进一步的研究显示,HA122蛋白特异的存在于多角体病毒核衣壳中。已获得的研究结果表明该独特基因编码一个特异存在于ODV核衣壳中的结构蛋白。 杆状病毒膜融合蛋白(EFP)是病毒功能及分类研究的一个重要蛋白,包括AcMNPV GP64,LdMNPVLD130,SeMNPVSE8和HaSNPV HA133。第四章对HaSNPV的膜融 中国科学院硕士学位论文 中义摘要 合蛋白基因(Haj33)的功能做了深入的研究。首先对 HaSNPV的出芽病毒的主蛋白进 行测序,结果表面该蛋白由Ha133的C端大片段编码。基于此我们制备两个特异地作 用于*片段(aal64677)和 FZ片段(aall59)的鸡源多克隆抗体。Western blot结果 显示* (62kDa)和 FZ(20kDa)同时存在于 HaSNPV BV中,并以 H硫键结合成 FO (一80kDa)。转录和翻译的时相显示该基因的转录和蛋白翻译是从感染后24小时开始。 衣酶素抑制实验显示只有FZ片段被N糖基化。gP64缺失并引入Ha13三的重组ACMNPV 能感染SN细胞系,这表明Ha1刀能拯救gp64缺失的ACMNPV并实现功能互补。对 该重组病毒 BV的 Western blot检测,结果表明 FI和 FZ同时存在并以二硫键相连。在 HaSNPV BV中没有发现HA133的多聚体,然而该重组病毒BV中却有三种HA133的 多聚体存在。
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