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二十二碳五烯酸(docosapentaenoic acid,DPA)是多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty acids,PUFA)代谢过程中的中间产物,包括n-6和n-3两种同分异构体,即DPAn-6(4,7,10,13,16-22:5)和DPAn-3(7,10,13,16,19-22:5),二者具有不同的生理活性。由于含量较低、来源较少,有关这两种脂肪酸的研究较少。本文通过分析六种海洋生物油的脂肪酸组成,筛选出适宜富集DPAn-6和DPAn-3的原料油,系统研究和优化了尿素包合、低温溶剂结晶、制备液相富集分离这两种脂肪酸的工艺条件,并建立脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的RAW264.7细胞模型,比较研究了DPAn-6和DPAn-3的体外抗炎活性,为探明DPA的功能和开发其用途提供依据。主要内容包括:1.为了获得可用于富集分离DPAn-6和DPAn-3的适宜原料,采用GC/MS分析了裂壶藻油、海豹油、三文鱼油、鳀鱼油、金枪鱼油及河豚鱼油六种海生油脂的脂肪酸组成。结果表明,裂壶藻油中DPAn-6和DHA主要分布在sn-1,3位,MUFA主要分布在sn-2位,SFA则均匀地分布在甘油三酯中;海豹油中sn-2位的SFA、MUFA均高于其在sn-1,3位的含量,EPA、DPAn-3和DHA主要分布在sn-1,3位;四种鱼油中DPAn-3和DHA均倾向于优先分布在sn-2位,而EPA在sn-1,3位的分布较多。裂壶藻油的DPAn-6含量为15.63%,且脂肪酸组成相对简单,适宜作为富集分离DPAn-6的原料。海豹油、三文鱼油、河豚鱼油的DPAn-3含量较高,通过尿素包合法富集其DPAn-3,主要影响因素是原料油的脂肪酸组成,海豹油经尿素包合后,非包合相中DPAn-3含量最高,适宜作为富集DPAn-3的原料。2.采用响应面分析法研究了尿素包合法富集海豹油中DPAn-3的工艺。优化的工艺条件为:脂肪酸/尿素比1:3.7(g/g),包合温度1.3℃,包合时间17.5 h,得到DPAn-3的含量为12.75%,得率48.53%。进一步经制备液相色谱分离,终产物的DPAn-3纯度达到93.12%,回收率78.05%,得率37.87%。3.研究了低温溶剂结晶法富集裂壶藻油及其DPAn-6的工艺条件。在脂肪酸/乙腈比1:5(w/v)、结晶温度-60℃、结晶80 min可以得到DPAn-6和DHA分别为26.26±0.06%和64.81±0.69%的富集物,得率分别为53.58±2.14%和52.57±2.09%;而在富集裂壶藻油中的PUFA时,在10%的油/丙酮(w/v)、-80℃下结晶4 h,可得到DPAn-6和DHA分别为21.56±0.27%和53.87±2.10%的浓缩物,两种脂肪酸的总含量由原料中的54.69%增加至75.43%±2.37%。进一步经制备液相分离,终产物的DPAn-6纯度为95.16%,回收率93.7%,得率50.21%。4.建立了LPS诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7炎症细胞模型,研究了DPAn-6、DPAn-3的抗炎活性,并与EPA、DHA相对比。MTT法检验结果表明,当干预浓度为25-100μM时,这四种PUFA对细胞活性均无显著影响;采用Griess试剂检测了不同浓度的这四种PUFA对RAW264.7产NO的影响,在试验浓度范围内,四种PUFA均可以显著抑制NO的含量。采用ELISA方法测定了四种PUFA干预RAW264.7细胞后上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α和IL-10的分泌量,在试验浓度范围内,它们均可以显著抑制促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-α的产生,而促进抗炎因子IL-10的产生,但四种PUFA对炎症因子的作用效果不同,DPAn-6、DPAn-3对TNF-α的抑制作用最明显,对IL-10的促进作用最显著。通过荧光实时定量RT-PCR研究发现,DPAn-3在抑制IL-1β、IL-6、TNF-α的m RNA表达上显著高于其他三种PUFA,而在促进IL-10的m RNA表达上,以DPAn-6的作用最显著。说明DPAn-6和DPAn-3具有良好的抗炎活性。采用GC分析了这四种PUFA干预RAW264.7细胞后脂肪酸组成的变化,发现EPA干预组中DPAn-3的含量显著增加,表明EPA向DPAn-3发生了转化。