目的:探讨CDKN2A基因在高级别胶质瘤发病机制中的作用。方法:应用i TRAQ技术探讨高级别胶质瘤患者肿瘤组织相对于非肿瘤患者差异表达蛋白,根据GO功能富集和KEGG通路富集确定此次研究的目的基因;GO富集主要为核酸的代谢过程,KEGG通路富集主要集中为含核苷酸的代谢通路;随后根据i TRAQ结果,利用Cas9基因敲除系统靶向敲除CDKN2A基因,建立基因敲除细胞系;利用慢病毒结合药物筛查,建立CDKN2A基因稳定表达细胞系。应用WST-1检测敲除组、未处理组、稳定表达组的细胞增殖活性;利用流式技术检测敲除组、未处理组、稳定表达组的细胞周期;利用ELISA技术检测敲除组、未处理组、稳定表达组cyclin D1、p RB蛋白含量,利用划痕实验检测U251敲除组、未处理组、稳定表达组加入相同药物后24小时闭合率。结果:(1)此次i TRAQ共寻找出差异蛋白1074种,其中上调蛋白616种,下调蛋白458种。差异蛋白GO富集和KEGG富集主要集中在核酸的合成和代谢过程;随细胞数的增多,敲除组的生长速率高于未处理组和稳定表达组,差异有统计学意义,稳定表达组细胞生长速率低于敲除组和未处理组且差异有统计学意义。(3)敲除组的细胞周期在G0-G1期长于稳定表达组,差异有统计学意义,说明CDKN2A基因主要抑制细胞从G0-G1期生长。(4)U251、U87细胞中稳定表达CDKN2A基因的细胞cyclin D1及p RB蛋白含量较低,低于敲除组及未处理组,其中敲除组含量最高,差异有统计学意义(P<0.05)。(5)U251细胞系中CDKN2A基因过表达后24小时闭合率减低。结论:(1)在胶质瘤细胞中存在CDKN2A基因的表达量的异常,CDKN2A基因参与胶质瘤的发生、发展。(2)CDKN2A稳定过表达可以有效抑制胶质瘤细胞的增殖,若抑制CDKN2A基因的表达,胶质瘤细胞增殖。(3)CDKN2A基因主要作用于细胞周期,CDKN2A基因的稳定过表达使细胞GO期细胞数减少,说明该基因有使细胞周期停滞在GO的作用,其作用通路可能是CDKN2A-cyclin D1-p RB通路,若该通路失活或变异,可能造成细胞增殖加快,凋亡受阻。质瘤的发生、发展中起着重要作用,可能是胶质瘤潜在的治疗靶点。(4)CDKN2A基因过表达时,胶质瘤细胞对卡莫司汀的抗肿瘤作用更加敏感,CDKN2A基因可能是克服胶质瘤耐药的潜在位点。