【摘 要】
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目的了解本地区临床分离的铜绿假单胞菌对β-内酰胺类和喹诺酮类药物的耐药情况,为临床合理用药提供参考依据;对多重耐药铜绿假单胞菌进行基因分型,了解其同源性;重点研究铜
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目的了解本地区临床分离的铜绿假单胞菌对β-内酰胺类和喹诺酮类药物的耐药情况,为临床合理用药提供参考依据;对多重耐药铜绿假单胞菌进行基因分型,了解其同源性;重点研究铜绿假单胞菌产β-内酰胺酶的特性和对喹诺酮类药物的耐药机制。方法1、用琼脂稀释法检测β-内酰胺类和喹诺酮类药物对70株铜绿假单胞菌临床分离株的MIC,并检测泵抑制剂CCCP对MIC的影响;用Nitrocefin显色法对铜绿假单胞菌产β-内酰胺酶进行定性检测;改良三维试验检测AmpC酶和ESBLs;对多重耐药株选用ERIC2为引物,进行PCR分型,确定其同源性。2、用特异性引物对质粒和染色体DNA进行PCR扩增,以确定产酶基因的位置及类型;IEF电泳检测细菌所产TEMβ-内酰胺酶的pI;对TEM基因进行DNA序列测定和同源性分析,并对其进行原核表达。3、从临床铜绿假单胞菌中筛选出CIP耐药菌10珠和敏感菌10珠,分别对两组进行CIP摄取实验,并对Ⅱ类拓扑异构酶gyrA和parC基因的QRDR进行PCR扩增,用限制性内切酶SacⅡ对保守区进行酶切,
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