奶牛乳房炎是奶牛中最常见也是造成养殖损失最为严重的一种疾病,其中链球菌是导致奶牛乳房炎比较常见的一种病原菌,它包括乳房链球菌、停乳链球菌、无乳链球菌、兽疫链球菌和化脓性链球菌等在内的多种链球菌,它们不仅感染乳房腺体,还会造成奶牛乳腺组织的损伤或破坏,长期减少产奶量,甚至会造成乳区泌乳功能的丧失,使奶牛提前淘汰,给奶牛养殖业带来巨大的经济损失。本研究为了了解广西部分地区奶牛场乳房炎链球菌的流行情况,寻找对链球菌敏感的药物,同时制备抗链球菌多克隆抗体,以期为指导临床用药和快速诊断试剂盒及试纸条的研制提供参考而设计了本实验。本实验从广西6个规模化奶牛场共采集患乳房炎的奶样75份,通过传统的病原微生物学、革兰氏染色与镜检、PCR以及生化实验等方法对乳房炎奶样中链球菌进行分离鉴定,并对感染链球菌的乳房炎的发生情况作了初步统计分析。随机抽取临床鉴定的链球菌菌株14株进行小白鼠攻毒实验,以不同浓度链球菌分3组分别攻毒14只昆明系小白鼠,另选6只小白鼠注射生理盐水为对照组,饲喂3d观察小白鼠的发病情况,并进行链球菌致病力的分析。用大黄、黄连、黄岑、五味子、金银花等11种中药进行单味药的药敏实验,同时用牛场提供的16种药物以药敏纸片法测定其抑菌直径。选取致病力强的链球菌菌株2株作为颗粒性抗原,多次免疫大白兔、大鼠各一只,将获取的抗血清经饱和硫酸铵进行抗体蛋白纯化,再通过间接ELISA和SDS-PAGE电泳对抗血清的效价和特异性进行检测。本研究的结果如下：1、采集的75份奶样中共分离病原菌328株。(1)革兰染色镜检,328株菌株中,有160株为链球菌,占总菌株比率的48.78%。其中F牛场乳房炎链球菌感染最为严重,感染率高达90.48%,其次为A和C牛场,感染率分别为51.24%、51.85%,其余牛场的感染率均在40-50%之间。(2)菌液PCR鉴定,160株中有152株被鉴定为阳性,占分离总菌株数的46.34%。2、用链球菌对小白鼠进行攻毒实验,发现该菌对小白鼠的半数致死浓度为2.04×108cfu/mL。其药敏实验的结果为：牛场的部分药物对链球菌有一定的抑制作用,链球菌对抗生素氨苄西林钠和阿莫健极敏；对中药中的大黄、黄芩、黄连3种药物极敏,而对甘草、金银花、鱼腥草、川芎等几乎无反应。3、通过间接ELISA对多克隆抗体效价测定,大白兔、大鼠的最高抗体效价分别为1:819200、1:512000,抗血清分别纯化两次,通过核酸分析仪测定结果分别为14.29μg/mL、11.44μg/mL。抗血清通过SDS-PAGE垂直电泳检测,可见特异性及纯度较高的抗体条带,其分子量分别约为55KD、25KD,与理论分子量大小相符。用间接ELISA法检测白色念珠菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等其它菌株均无交叉反应现象。结论：查明了广西6个规模化奶牛场链球菌性乳房炎的平均检出数量占细菌检出总数的48.78%,检出率范围为40.5%-90.48%。链球菌毒力实验发现该菌对小鼠的半数致死量为2.04×108cfu/ml,该菌有极强的致病性,致病率100%,致小鼠多个器官发生病变、少数小鼠12h内急性死亡。筛选出对链球菌极度敏感的阿莫健、氨苄西林钠等2种西药和黄连、大黄、黄岑等3种中药,为链球菌性乳房炎的临床用药提供实验依据。通过大白兔、大鼠多次免疫,间接抗血清ELISA的建立,获得了较高效价的抗链球菌多克隆抗体,为快速诊断试剂盒及试纸条的研制提供了研究基础。