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鳗弧菌(Vibrio anguillarum)属弧菌科,弧菌属,革兰氏阴性菌。鳗弧菌能够感染多种海水养殖经济鱼类。本实验室对从山东黄海海域中患病海鲈鱼体内分离的鳗弧菌野生强毒株MVM425进行了内源性毒力质粒pEIB1的测序工作,也进行过该菌株的全基因组草图构建。本课题通过Pacbio高通量测序平台进行序列测定以及PCR验证,并结合之前Illumina Solexa和454测序平台的实验结果,获得了鳗弧菌野生株MVM425的全基因组完成图谱。鳗弧菌MVM425含有两条染色体以及一个内源性毒力质粒。基因组大小为4.2 Mbp,其中1号染色体Chrl含有3,164,924 bp,2号染色体Chr2含有1,141,928 bp,质粒 pEIBl 含有 66,521 bp。Chrl 中包含 2771 个 CDS,28 个 rRNA 和 98 个 tRNA。Chr2中含有972个CDS以及4个tRNA。本论文利用构建的转座子突变株文库,结合Illumina Hiseq平台对鳗弧菌转座子突变株文库进行转座子插入测序(Tn-seq)。通过在含2%NaCl的LB体外培养和鱼体内存活条件筛选出与鳗弧菌体外生长和体内感染相关基因。针对转座子文库覆盖度较低的问题,本课题开发了相关的生物信息学方法进行了 Tn-seq结果分析。Tn-seq结果中发现了 473个鳗弧菌在含2%NaCl的LB体外生长必需基因和359个与大菱鲆体内感染相关条件必需基因。通过比较条件必需基因突变株在大菱鲆肝脏、脾脏和肾脏中的表现,证明在感染过程中各基因为该菌定植在不同器官的贡献度存在差异。此外,我们通过使用基因敲除突变体与野生株进行体内竞争性感染实验验证了 Tn-seq结果。全面的基因组学和功能基因组学分析发现了涉及能量代谢、氮代谢、核苷酸合成、氨基酸合成、辅因子、铁载体合成、分泌系统(T2SS和T6SS)、群体感应和鞭毛生物合成等的重要途径的必需基因以及条件必需基因。这项研究从全基因组层面提供了大量与感染鱼类宿主相关的鳗弧菌基因的信息,将有助于深入理解其致病机理以及促进开发高效诊断技术和疫苗。