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细菌素的定义,由某些细菌在生理代谢的过程中,通过自身核糖体合成机制,产生出一类具有生物活性的蛋白质或者多肽,这些物质可以杀灭或抑制与之相同或相似生长环境的其他微生物。类细菌素是另一种类型的抗菌肽,它不仅能够抑制革兰氏阳性细菌,并且对革兰氏阴性细菌和/或真菌也有部分抑制作用,这个特性决定了类细菌素这种抗菌肽比细菌素的应用前景更加广泛。本课题组前期研究发现,乳酸乳球菌NFL菌株所产类细菌素能够抑制常见革兰氏阳性和阴性菌,且耐高温、对蛋白酶敏感,是一种有开发潜力的食品保鲜剂。为提高该类细菌素产量,本研究探索简单有效的高产类细菌素乳酸乳球菌NFL的诱变方法。利用热诱变、紫外诱变、紫外-热胁迫复合诱变、热-紫外同步诱变及H2O2诱变等方法对野生型菌株乳酸乳球菌NFL进行诱变,以大肠杆菌CMCC44102为指示菌,采用双层平板琼脂扩散法进行抑菌实验对突变株进行筛选。另外,琼脂扩散法是测定包括类细菌素在内的抗菌物质效价常用的方法,但人为操作因素常常影响实验结果的准确性。本研究探索建立一种测定准确、操作简单、无需特殊设备的分光光度计比浊法来测定各种抗菌物质的效价。研究结果如下:乳酸乳球菌NFL菌株热诱变的最佳条件为:60℃水浴3.5 min,得到的突变株H-29类细菌素产量比野生型菌株提高了27.1±1.8%;紫外诱变的最佳条件为:紫外灯15 w,照射垂直距离30 cm,照射时间25 s,得到的突变株UV-1类细菌素产量比野生型菌株提高了12.1±3.1%;先紫外后热胁迫复合诱变的最佳条件为:紫外突变株UV-1在44℃下培养,得到的突变株UV-HS-8类细菌素产量比野生型菌株提高了20±1.9%;热与紫外同步诱变的最佳条件为:在50℃热诱变4 min的过程中,在2 min这个时刻,在照射垂直距离20 cm处照射10 s紫外线,得到的突变株H-UV-19类细菌素产量比野生型菌株提高了19.4±1.3%;H2O2诱变的最佳条件为:在80 mmol/L H2O2水溶液中室温处理15 min,得到的突变株HP-2类细菌素产量比野生型菌株提高了11.4±1.1%。选育得到的这5株最优突变株经10代的传代培养,其产量性状稳定。所试的5种诱变方法均可提高乳酸乳球菌类细菌素产量,其中诱变效果最好的是热诱变,其正突变幅度比紫外诱变的提高了13%;其次是紫外-热胁迫复合诱变和热-紫外同步诱变;H2O2诱变效果与紫外诱变的基本相当。以抑菌率最高时对应的培养时间为取样时间点,在中等接种量下,在本实验的浓度范围内,细菌素nisin、类细菌素NFL和抗生素硫酸庆大霉素这三种抗菌物质的浓度与抑菌率之间的线性关系良好,R2值均高于0.99,标准曲线成立。本法适用于设备条件简单的实验室准确测定各类抗菌物质效价。