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背景和目的:p53凋亡刺激蛋白抑制剂(inhibitor of apoptosis-stimulating protein of p53,iASPP)属于ASPP家族成员,其能与p53结合,下调p53对凋亡相关靶基因的转录激活作用,因此可能与肿瘤的生成相关。先前研究通过扩增iASPP/RAI的开放阅读框序列,克隆出了iASPP的一个新亚型——iASPP剪切变异体(iASPP splice variant,iASPP-SV)。iASPP-SV由407个氨基酸组成,是核蛋白,iASPP-SV和iASPP(828)的羧基端一致,氨基端不同。并且,在体内iASPP-SV能与p53结合,抑制p53对Bax和p21启动子的转录性激活。但是iASPP-SV在人类肿瘤细胞中的表达水平及其对细胞增殖的影响还不完全清楚。因此,该研究旨在检测iASPP-SV m RNA的5’末端序列,确定iASPP-SV的转录起始区,明确iASPP基因的结构;探讨iASPP-SV和iASPP(828)在8种人类肿瘤细胞系中的表达情况;检测iASPP-SV和iASPP(828)对细胞增殖能力的影响,其在肿瘤发生、发展中的作用;及iASPP-SV、iASPP(828)和p53与NF-κB/p65之间的关系。方法:用5’-基因末端快速扩增(5’-rapid amplification of c DNA ends,RACE)方法检测乳腺癌细胞系MCF-7的iASPP-SV m RNA的5’末端序列,确定iASPP-SV的转录起始区,明确iASPP基因的结构。构建过表达iASPP-SV和iASPP(828)的质粒p FLAG-iASPP-SV和p FLAG-iASPP(828),分别转染HEK 293细胞,获得稳定表达iASPP-SV和iASPP(828)的HEK 293细胞,并作为阳性对照细胞。采用蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测8种人类肿瘤细胞系中iASPP-SV和iASPP(828)蛋白的表达情况。质粒p FLAG-iASPP-SV和p FLAG-iASPP(828)分别转染NIH 3T3细胞,建立稳定表达iASPP-SV和iASPP(828)的NIH 3T3细胞系。并且应用细胞增殖分析和克隆形成实验分别检测iASPP-SV和iASPP(828)是否能促进细胞增殖、是否与肿瘤的形成相关。用荧光素酶报告基因实验检测iASPP-SV、iASPP(828)和p53与NF-κB/p65的相互作用关系。结果:5’-基因末端快速扩增实验结果显示,iASPP-SV m RNA的5’末端序列与编码iASPP(828)的m RNA(RAI(AF078037.1))序列几乎相同,iASPP-SV和iASPP(828)是由同一个基因转录,iASPP-SV由RAI序列(DQ986418.1)编码。Western blot实验结果表明,内源性iASPP-SV在多种人类肿瘤细胞系中表达。细胞增殖分析和克隆形成实验证实iASPP-SV与iASPP(828)都能促进细胞增殖,并且iASPP-SV比iASPP(828)的促进细胞增殖能力更强。荧光素酶报告基因实验证实iASPP-SV、iASPP(828)和p53能与NF-κB/p65结合并且抑制其转录。结论:iASPP-SV和iASPP(828)的区别在于N末端不同,我们研究发现iASPP-SV m RNA的5’末端序列与RAI(AF078037.1)几乎相同。因此可以确定iASPP-SV和iASPP(828)是由同一个基因转录,并且iASPP-SV由RAI序列(DQ986418.1)编码。iASPP能通过选择性剪接编码iASPP(828个氨基酸)和iASPP-SV(407个氨基酸)亚型。iASPP-SV在多种人类肿瘤细胞中表达,并且iASPP-SV和iASPP(828)能促进细胞增殖,iASPP-SV比iASPP(828)的促进细胞增殖能力更强,因此iASPP-SV和iASPP(828)可能与肿瘤形成相关,并且这可能与iASPP-SV能抑制p53的转录活性相关。因此iASPP-SV和iASPP(828)可能作为肿瘤治疗的潜在靶点。然而,iASPP-SV和iASPP(828)不仅能通过抑制p53对凋亡相关靶基因的转录激活作用、抑制细胞凋亡,而且可能通过抑制NF-κB的转录活性促进细胞凋亡。因此iASPP-SV可能是双功能蛋白,与不同的蛋白相互作用,发挥不同功能,这依赖于不同的细胞背景。