IBDVvp2基因高变区序列测定与进化分析

来源 :中国科学院武汉病毒研究所 | 被引量 : 0次 | 上传用户:bennkyoumusi
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鸡传染性法氏囊病(infection bursal disease, IBD)是由鸡传染性法氏囊病毒(Infectious Bursal Disease Virus,IBDV)引起的鸡和火鸡的一种高度接触性传染疾病。本病主要侵2-11周龄鸡,其中3-6周龄发病最为常见.感染该病后,鸡体法氏囊遭到严重破坏,重症者导致直接死亡,感染而不死亡者则发生免疫抑制,导致鸡对马立克氏疫苗、新城疫疫苗等常见疫病疫苗的免疫应答降低,导致免疫失败.此疾病给世界各国的禽养殖业带来了巨大损失.IBDV属于双节段dsRNA病毒科(Birnaviridae)禽双节段RNA病毒属(Avibirnavius),无囊膜,呈二十面体对称,病毒粒子直径60nm.其基因组由A和B两个双链RNA片段组成。VP2基因位于IBDV-A节段,编码形成37-40kda蛋白是IBDV的主要结构蛋白和保护性抗原成分。VP2基因内存在一个氨基酸残基高变区(206至305个氨基酸),不同毒株间在这段区域的变异很大.这段氨基酸残基高变区内主要包括一个七肽区(S-W-S-A-S-G-S)和两个亲水区(I (212-224)和Ⅱ(314-324))。七肽区的氨基酸位点特别是丝氨酸位点与IBDV的毒力和致病力密切相关,当这些位点发生变化时,IBDV发生致弱变异为弱毒株.亲水区对于超强毒株抗原性极为重要,其氨基酸残基的改变极可能导致病毒搞原性的改变.另外,高变区内有一些特征性氨基酸位点(Q249、G 254、N279和T284)对IBDV毒力强弱具有决定作用,发生变化Q249K、G 254S、N279D和T284A时,IBDV成为超强毒株(very virulent IBDV,vvIBDV)。本研究采用来源于江苏地区分离的六株IBDV毒株,针对其IBDV-VP2基因高变区在不同毒株间发生的不同变化,以RT-PCR法对其VP2基因高变区进行扩增,构建重组质粒pMD18T-VP2并测序,对测序结果进行分析,并选取较典型的一些已发表IBDV毒株,与其高变区进行序列比对。以ClustalX软件,得到基因序列及氨基酸序列同同源性,IBDV Y3、P2G、P8G、SZ、Y5和W04(六株)与D6984(荷兰)的同源性达到99.0%以上,与其它一些超强毒株的同源性也达到了97.8%以上,并在关键氨基酸位点符合vvIBDV特征,表明本实验采用的六株IBDV均为vvIBDV.采用Phylip3.5软件分析作出进化树,结果显示六个毒株与欧<WP=3>洲和日本的超强毒株有较近的亲缘关系,而与美洲株较远。从同源性比较及进化树分析结果,为IBDV分子流行病学研究和疫苗的研制提供了科学依据。
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