论文部分内容阅读
CA是由藤泽制药公司于1982年提取的一种真菌代谢产物。适用于防治器官移植后的排斥反应,其临床疗效是环孢素(CsA)的10～100倍。CA自1989年试用于临床以来,取得了良好的评价。现已作为预防、治疗排斥反应以及自身免疫性肝炎的一线药物。目前国内市场主要为进口的CA固体分散体胶囊,价格昂贵。由于CA在水中几乎不溶,溶解度仅为2～3μg/ml,并且CA很不稳定,因此本研究选择了制备一种能增大CA溶解度,提高其稳定性的制剂。自微乳药物传递系统(self-microemulsifying drug delivery system,SMEDDS)由油相、乳化剂和助乳化剂组成,口服后在胃肠蠕动下自发分散形成微乳,SMEDDS可作为水难溶性药物的载体,可提高药物的溶出度和渗透率,能增加药物的口服生物利用度,近年来受到药学领域的瞩目。结合CA的理化性质和SMEDDS在提高难溶性药物生物利用度方面的优势,本课题选择了制备CA自微乳,并对其稳定性和生物利用度进行了研究。目前国内外还未有CA自微乳剂型上市,因此CA自微乳的研究具有现实意义。目的:选择合适的乳化剂、助乳化剂、油相、稳定剂,制备CA自微乳。建立CA自微乳体内、外分析方法,对CA自微乳进行质量评价,并对CA自微乳的稳定性和生物利用度进行考察。方法:1 CA自微乳的制备:首先对空白自微乳的基本处方进行了筛选并确定了空白处方的组成。然后对稳定剂进行了筛选,选择稳定剂A作为CA自微乳的稳定剂,选择BHT作为抗氧剂。在处方优化过程中,确定了处方的含药量,对处方中的乳化剂、助乳化剂、油相以及稳定剂的用量进行了优化。按优化后的处方制备稳定性较高的CA自微乳,并压制CA自微乳软胶囊,用于溶出度测定和动物试验。2 CA自微乳的质量评价:建立CA自微乳含量和溶出度测定的HPLC方法。对CA自微乳的外观、粘度和稀释后微乳的粒径、Zeta电位进行考察。按最佳处方制备CA自微乳,分别进行高温试验、强光照射试验、加速试验和长期稳定性试验,对其稳定性进行考察。3 CA自微乳的药代动力学研究:以健康雄性家犬为试验动物,考察CA自微乳软胶囊的药代动力学,并与参比制剂进行了比较。采用单剂量方式口服给药(0.5mg/kg),定时股静脉取血,用液相色谱-串联质谱法测定血药浓度。采用3p87程序对血药浓度数据进行处理,对比两制剂在家犬体内的生物利用度。结果:1从稳定性、稀释后粒径、溶出度、生物利用度等方面综合考虑,最终确定了CA自微乳的最佳处方为: CA 0.5g聚氧乙烯氢化蓖麻油(RH40) 40g 1,2-丙二醇15g小分子酯(CP) 44g稳定剂A 1.0g BHT 0.05g2 HPLC测定CA自微乳含量的标准曲线方程为: A=1.6225×104X-9.9332×103,(r=0.9999, n=7)溶剂选用50%的乙腈-水溶液,此时CA异构体Ⅱ的转化比例为4.93%。方法平均回收率为99.89%,低、中、高3种浓度样品的日内测定结果的相对标准偏差(RSD)分别为1.43%、1.57%、0.58%(n=6);中浓度样品日间测定结果的RSD为1.32%(n=6),均符合中国药典规定。3 HPLC测定CA自微乳软胶囊溶出度的标准曲线方程为: A=7.253×104X-8.996×103,(r=0.9999, n=7)溶出度测定方法按中国药典2005年版附录XC第三法,溶出介质为纯水100ml,水温为37±0.5℃,转速为100r/min。低、中、高三种浓度样品的回收率分别为99.14%、99.51%、99.59%,连续测定浓度为0.01mg/ml的同一样品6次,峰面积的RSD值为1.43%,符合中国药典规定。4 CA自微乳的质量评价及稳定性研究按最佳处方制备的CA自微乳为无色透明均一的液体,25℃时,粘度为46.0mPa·s;CA自微乳用重蒸水稀释200倍后,形成微乳的粒径约为17nm,Zeta电位为-21.3mV(25℃)。高温试验结果表明CA自微乳在60±2℃下放置10天,样品外观、粘度、粒径无明显变化,但含量约降低了5%,有关物质增长了0.41%;强光照射试验发现,CA自微乳对4500±500lx的强光敏感,放置10天后有关物质略有增加;加速试验显示CA自微乳在40±2℃,相对湿度75±5%条件下加速6个月,三批样品的外观、粘度、粒径均无明显变化,含量约降低了3%,有关物质在2%以内;长期稳定性考察显示9个月后三批样品有关物质分别为0.29%、0.27%、0.24%,含量降低值在1%以内,结果表明在25±2℃条件下,CA自微乳的稳定性较高。5采用3p87程序对血药浓度数据进行处理,结果表明最佳拟合模型为二级模型一级吸收,权重因子为1/c2。CA自微乳软胶囊和参比制剂的药物动力学参数分别为:t1/2 (α):1.37 h,2.39 h;t1/2 (β):13.13 h,19.54 h;T(peak):0.79 h,2.92 h;C(max):36.21 ng/ml,11.49 ng/ml; AUC:238.29 (ng/ml) *h,174.47 (ng/ml) *h。结论:按最优化处方制备的CA自微乳,物理和化学稳定性均较高,25±2℃条件下放置9个月,CA自微乳外观、粘度、粒径及Zeta电位均无变化,含量降低值小于1%,有关物质在0.3%以内。CA自微乳的生物利用度高于参比制剂。本研究显著提高了CA在自微乳基质中的稳定性,在开发CA自微乳剂型方面取得了突破性进展。