大足黑山羊妊娠不同阶段胎盘线粒体结构及能量代谢的比较

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山羊胎盘属于子叶型胎盘(cotyledons placenta),具有造血、运输、代谢、内分泌、屏障和免疫等许多重要功能。胎盘循环建立后,胎儿通过胎盘子叶获得营养物质,而胎盘子叶细胞中的线粒体通过氧化磷酸化产生ATP,为母-胎的营养运输提供动力。因此,胎盘线粒体发挥正常功能是保证胎儿生长发育,进而维持妊娠的关键。若胎盘组织中线粒体功能不足则会导致胎盘物质运输障碍,胎儿体重降低,甚至引发宫内生长迟缓。目前对山羊妊娠过程中胎儿及胎盘发育的研究相对匮乏,尤其是在胎盘线粒体结构及能量代谢的研究上几近空白。大足黑山羊是具有高繁性能的山羊遗传资源,主要分布于重庆大足及周边地区。本实验前期研究结果表明大足黑山羊产羔数与胎盘效率呈正相关趋势,但在妊娠过程中胎盘效率的变化规律尚不清楚,同时也缺乏对线粒体结构和能量代谢方面的研究,这些问题都限制了我们了解大足黑山羊妊娠发育过程及胎盘物质转运功能。因此本研究通过测定妊娠不同阶段大足黑山羊胎儿及胎盘发育情况,对线粒体结构及能量代谢进行比较,以此探究大足黑山羊妊娠过程中胎盘效率及胎盘线粒体结构和功能的变化,为深层次解析胎盘在维持大足黑山羊胎儿正常妊娠过程中的作用提供参考。本试验以妊娠20、25、30、60、90和120d的大足黑山羊胎儿及胎盘为研究对象,采用HE染色切片、超显微透射电镜、酶联反应等方法,对大足黑山羊胎盘发育、线粒体结构和能量代谢进行研究;采用实时荧光定量PCR方法,比较胎盘线粒体基因的表达量变化。主要研究结果如下:1、试验观察妊娠早期的胎盘发现其分化快于胎儿,并在妊娠30d时已延伸至双侧子宫角。在妊娠60至90d,胎儿以13.09g/d的速度增重,妊娠120d后胎儿以34.911g/d的速度增重。胎盘效率随着妊娠时间而逐渐增长,由妊娠20d时的0.194升高至妊娠120d时的2.692,并且差异极显著(P<0.01)。通过组织切片观察胎盘结构发现,妊娠20、25和30d的胎盘细胞数量增多,密度增加,胎盘逐渐形成腔室结构。在妊娠60d后,胎盘子叶绒毛数量增多,长度增加,并逐渐深入子宫阜肌层。2、通过超微电镜观察线粒体结构变化,结果发现胎盘线粒体形态完整,数量随着妊娠进行而增多并大量聚集在子叶绒毛处附近。3、试验对胎盘子叶组织中线粒体细胞色素C氧化酶、琥珀酸脱氢酶、Ca++-Mg++-ATP酶和Na+-K+-ATP酶的活性测定发现,在妊娠过程中胎盘子叶线粒体酶活性极显著增加(P<0.01),其中妊娠90至120d的上升趋势明显,表明线粒体能量代谢逐渐增强。4、在妊娠25d的胎盘子叶及子宫阜中基因COXIV、SDHA、TFAM、PGC-1ɑ、NRF-1的表达量达到高峰,至妊娠30d则显著降低,其中线粒体COXIV基因在子叶中的表达量由0.84降至0.09,差异极显著(P<0.01),核基因PGC在子叶中的表达量由1.21降至0.665,核基因NRF在子叶中的表达量由1.06降至0.223,核基因TFAM在子宫阜中的表达量由3.07降至1.32。妊娠60d后胎盘循环已建立,线粒体相关基因在子叶组织中的表达量不断升高,但差异不显著(P>0.05)。本试验表明大足黑山羊妊娠过程中,随着胎儿发育加快,胎盘效率升高,胎盘线粒体数量和能量代谢功能显著增强。
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