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【研究背景】原发性肝癌是消化系统常见的一种恶性肿瘤,其生长、发展和转移与血管形成密切相关。近来研究表明,s Flt-1(可溶性血管内皮因子受体-1)能够通过竞争性抑制Flt-1(血管内皮生长因子受体-1)抑制肿瘤血管的形成。骨髓间充质干细胞(MSCs)由于具有向肿瘤位点迁移的能力,而被广泛用作基因治疗肿瘤的良好载体。因此,本课题拟在体外构建s Flt-1慢病毒并导入MSCs,研究其对裸鼠肝癌皮下移植瘤微血管生成的影响。【方法】1.通过体外构建s Flt-1基因慢病毒载体,并感染BALB/C裸鼠来源的MSCs,PCR、Western blot与酶联免疫吸附试验(ELISA)检测其s Flt-1表达情况。2.通过将成功感染s Flt-1基因的MSCs与人脐静脉内皮细胞三维共培养,研究s Flt-1对小管生成的作用。3.预先经Di I染色的肝癌细胞株SMMC-7721建立裸鼠肝癌皮下移植瘤模型,两周后,载有绿色荧光蛋白的MSCs尾静脉注射到荷瘤裸鼠体内,7天后处死荷瘤裸鼠,取肿瘤标本、心、肝、肺制作冰冻切片,荧光显微镜下观察MSCs在体内分布情况。4.SMMC-7721建立裸鼠肝癌皮下移植瘤模型,两周后,尾静脉注射PBS、空病毒感染的MSCs(LV-NC-MSCs)、s Flt-1慢病毒(LV-s Flt-1)和s Flt-1慢病毒感染的MSCs(LV-s Flt-1-MSCs),测量肿瘤体积,免疫组化分析CD34、Ki-67与VEGF表达情况。5.统计学分析方法:总体均数的比较采用Mann–Whitney U检验,显著性水平α=0.05,P<0.05为有统计学差异。【结果】1.s Flt-1慢病毒感染MSCs与s Flt-1表达用s Flt-1慢病毒感染MSCs72h后,荧光显微镜观察感染效率高达90%,用PCR、Western blot与ELISA检测发现,LV-s Flt-1-MSCs在m RNA和蛋白水平上过表达s Flt-1(*P<0.05)。2.s Flt-1慢病毒修饰的MSCs抑制小管生成MSCs与HUVEC共培养后发现,s Flt-1过表达组(LV-s Flt-1-MSCs)小管数量明显低于阴性对照组(LV-NC-MSCs)和空白对照组(MSCs),差异有统计学意义(*P<0.05)。3.MSCs靶向迁移至肝癌位点冰冻切片结果显示,绿色荧光蛋白标记的MSCs主要迁移至肝癌位点,而很少出现在正常组织中。4.s Flt-1慢病毒修饰的MSCs抑制肝癌生长与血管生成LV-s Flt-1-MSCs治疗组的裸鼠肝癌体积和微血管密度均明显低于PBS对照组(*P<0.05)。而且,LV-s Flt-1-MSCs治疗组的荷瘤裸鼠生存期中位数高于PBS对照组,差异有统计学意义(*P<0.05)。而LV-NC-MSCs治疗组和LV-s Flt-1治疗组与PBS对照组无显著性差异。【结论】1.MSCs能够迁移至肝癌位点。2.s Flt-1慢病毒修饰的MSCs能够分泌s Flt-1,抑制肝癌血管生成与生长发展,延长荷瘤裸鼠生存期。