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目的:检测人舌鳞癌细胞株(Tca8113)细胞中 c-erbB-2、Bcl-2基因的表达水平,为进一步探讨 c-erbB-2、Bcl-2 基因在人舌鳞癌形成、发展过程中的作用机制,建立体外人舌鳞癌细胞株研究模型。方 法 采用实时荧光定量 PCR(real-time RT-PCR)实验技术检测人舌鳞癌Tca8113 细胞株中 c-erbB-2、Bcl-2 基因 mRNA 表达水平。 结果:从 TCA8113 细胞中抽提总 RNA,1%琼脂糖凝胶电泳图片上可见 5s,18s,28s 三条明显的条带,说明所提 RNA 质量较好。分光光度计(A260/A280)检测 Tca8113 细胞株细胞中 c-erbB-2、Bcl-2 基因mRNA 纯度均在 1.8～2.0,c-erbB-2、Bcl-2 基因标准曲线图可见线性良好,相关系数达到 1.0。通过基因表达扩增曲线图与看家基因 GAPDH校正,得出目的基因的相对含量,c-erbB-2 基因相对含量:4.97E+03copies/μl、看家基因 2.09E+06copies/μl、每百万看家基因含量 2.38E+03;Bcl-2 基因相对含量:5.47E+04 copies/μl、看家基因 2.09E+06copies/μl、每百万看家基因含量 2.62E+04。 结论:Bcl-2 与 c-erbB-2 基因的表达水平在人舌鳞癌 Tca8113 细胞株细胞中显著升高,可作为探讨 c-erbB-2、Bcl-2 基因在肿瘤形成、发展过程中的作用机制的体外肿瘤细胞株研究模型。 目的:探讨表达重组干扰质粒(RNAi 技术)对人舌鳞癌细胞株(Tca8113)细胞中 c-erbB-2、Bcl-2 基因表达的干扰效率。方 法 按siRNA 设计原则设计针对 c-erbB-2、Bcl-2 基因的 Oligo DNA,体外化学合成 Oligo DNA,Oligo DNA 退火、连接、转化、筛选克隆,构建针对 c-erbB-2 基因的表达重组 RNA 干扰质粒(psiC1、psiC2、psiC3)和针对 Bcl-2 基因的表达重组 RNA 干扰质粒(psiB1、psiB2、psiB3),细胞脂质体转染 Tca8113 细胞,Real-time RT-PCR 的标准曲线、扩增曲线和熔解曲线的数据收集处理,采用荧光定量 RT-PCR 方法检测重组干扰质粒对 Tca8113 细胞中 c-erbB-2、 Bcl-2 基因表达的干扰效率。 结果:实时荧光定量 RT-PCR 方法检测 psiC1、siC2、psiC3 质粒脂质体转染后 c-erbB-2 基因的表达情况结果显示:psiC2、psiC3 相对于对照组均有不同程度的干扰效果,psiC1 相对于对照没有干扰效果。