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实验研究(一)重组人酸性成纤维细胞生长因子乙醇脂质体的制备酸性成纤维细胞生长因子(acidic Fibroblast Growth Factor, aFGF)具有促细胞分裂增殖及促进血管生成等作用,但由于稳定性差,对温度、pH等敏感,极易失活,分子量大不易透皮等缺点,极大限制了其临床应用的范围。目的：以乙醇脂质体作为重组人酸性成纤维细胞生长因子(recombinant human acidic Fibroblast Growth Factor, rhaFGF)的载体,并实现制剂对rhaFGF的有效保护、缓释及促进其透皮的作用。以期制备出rhaFGF新的给药剂型,从而可以以一种简便易行、外用给药的方式使其可以透过皮肽屏障,作用于皮肤层,促进皮肤生长。方法：①乙醇注入法制备rhaFGF乙醇脂质体。②以包封率为考察指标确定rhaFGF乙醇脂质体的最佳药物浓度。③采用低温透射电镜观测rhaFGF乙醇脂质体的形态特征。结果：当rhaFGF的浓度为0.06mg/mL时,包封率达到最大为(58.82士2.56)%。在低温透射电镜下观察到rhaFGF乙醇脂质体大小均匀,粒径在200nm左右。结论：制备出一种rhaFGF乙醇脂质体,当其药物浓度达0.06mg/ml时其包封率最高。实验研究(二)乙醇脂质体结合微针技术促进重组人酸性成纤维细胞生长因子透皮吸收研究目的：探索rhaFGF透皮给药微创有效的给药方式及药物在皮肤组织内的代谢。方法：亚甲蓝染色经微针处理后的离体兔皮,观察微孔的分布和排列,冰冻切片HE染色观察微孔的深度。新西兰大白兔分别分为正常组、rhaFGF直接涂布组、rhaFGF乙醇脂质体涂布组、微针+空白脂质体组、微针+rhaFGF组、微针+rhaFGF乙醇脂质体组、皮内注射组；时间和浓度一定时,皮肤组织切片免疫荧光、免疫组织化学染色观察rhaFGF的分布,ELISA法检测皮肤组织匀浆液中rhaFGF的含量,经统计后分析不同给药方式中药物经皮渗透效果最好的一组。改变微针的长度及疏密度,将其分为微针长针稀疏组,微针短针稀疏组,微针长针致密组,微针短针致密组；ELISA法检测皮肤组织匀浆液中rhaFGF的含量,经统计后分析药物经皮渗透效果最好的一组。药物浓度一定时,微针处理皮肤后涂抹rhaFGF乙醇脂质体,分别于涂抹药物后15min,30min,45min,60min,120min,180min,240min取皮肤组织,ELISA法检测皮肤组织匀浆液中rhaFGF的含量,分析rhaFGF在皮肤组织内代谢的时间变化。结果：微针处理后离体兔皮微孔排列均匀,深度可达真皮层。动物给药30min后,rhaFGF直接涂布组、rhaFGF乙醇脂质体涂布组、微针+空白脂质体组与正常组皮肤组织匀浆液中rhaFGF含量差别无明显差异；微针+rhaFGF组、微针+rhaFGF乙醇脂质体组及皮内注射组皮肤组织匀浆液中rhaFGF含量分别高于rhaFGF直接涂布组,差异均有统计学意义(P<0.05)；微针+rhaFGF乙醇脂质体组高于微针+rhaFGF组皮肤组织匀浆液中rhaFGF含量,差异有统计学意义(P<0.05)。rhaFGF免疫荧光、免疫组化染色显示,微针+rhaFGF乙醇脂质体组真皮组织中有大量rhaFGF存在,且分布均匀；微针致密组较微针稀疏组皮肤组织匀浆液中rhaFGF含量高,微针长针致密组高于微针长针稀疏组,微针短针致密组高于微针短针稀疏组,差别具有统计学意义(P<0.05)。微针长针致密组与微针短针致密组,微针短针稀疏组与微针长针稀疏组组织匀浆液中rhaFGF含量无明显差别(P>0.05)。药物浓度一定时,于涂抹药物100mim后皮肤组织匀浆液中rhaFGF的含量达到最高,240min时皮肤组织匀浆液中rhaFGF的含量基本检测不出来。结论：本文的研究结果表明乙醇脂质体结合微针技术能取得较高的rhaFGF透皮效果,使rhaFGF外用给药促进皮肤组织增殖,加速皮瓣扩张成为可能。此方法简单易行,同时也为其它蛋白、多肽类大分子药物的经皮给药研究提供了新思路。