【摘 要】
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该研究通过用随机引物和集群分离分析方法筛选与桃果实扁平形基因连锁的RAPD分子标记OPP09-950.1.采用高盐法和CTAB法获得桃幼叶及韧皮部基因组DNA,DNA质量通过0.7﹪琼脂糖凝胶
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该研究通过用随机引物和集群分离分析方法筛选与桃果实扁平形基因连锁的RAPD分子标记OPP09-950.1.采用高盐法和CTAB法获得桃幼叶及韧皮部基因组DNA,DNA质量通过0.7﹪琼脂糖凝胶电泳检测及紫外分光光度计测定(OD<,260/280>),OD<,260>在0.2-0.4之间,OD<,260/280>值在1.8-2.0之间.通过比较,两种方法获得的模板对RAPD扩增结果没有影响.2.利用"弗扎罗德"和"晚熟大蟠桃"杂交组合建立两个DNA池,一个为扁平形基因池, 一个为非扁平形基因池.每个池中分别含10个个体,除扁平形性状和蜚 扁平形性状外, 其它性状是随机的.3.建立了一套适合桃的RAPD反应体系,其中DNA浓度为10mg/ul,TaqDNA聚合酶为1.5U,dNTP为0.2mM,Mg<2+>浓度为2mM,引物为0.2M. 4.利用PCR技术筛选了520个10碱基随机引物,发现只有引物OPP09在扁平形基因池中出现多态性, 而在非扁平基中未出现.多态性片段大小在950bp左右.5.进一步用父母本及其杂种的基因组作模板,用引物OPP09扩增,父本"晚熟大蟠桃"具有多态性片段,母本"弗扎罗德"无多态性片段.在66株杂种中,该标记发生了分离,在28株扁平形个体中有6株未出现该标记,在38株非扁平形个体中有7株出现了该标记,共有13株为交换型,说明该标记与扁平形基因不完全连锁.
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