不同倍性泥鳅鳍细胞培养及分子细胞遗传学研究

来源 :大连海洋大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:lndlfw
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为探讨不同倍性泥鳅染色体组构成及建立活体制备染色体标本的方法,本研究以自然二倍体泥鳅、正反杂交三倍体泥鳅(4n♀×2n♂、2n♀×4n♂)、自然四倍体泥鳅为研究对象,利用鳍组织培养获得染色体制备的材料,建立了泥鳅鳍组织细胞制备染色体标本方法,同时对不同倍性泥鳅鳍组织培养细胞的染色体的数目、核型做了分析,利用Ag-NORs、CMA3/DA/DAPI三重荧光染色技术等对不同北行泥鳅的染色体带型作了进行了系统研究。1.不同倍性泥鳅鳍细胞培养及染色体标本制备方法的建立选择10%的碘伏溶液杀菌效果良好,对于细胞生长影响较小,尤以15min效果最明显,细胞迁出迅速;在终止培养前3h加入秋水仙素至终浓度为1.5μg/ml,自然二倍体、杂交三倍体(4n♀×2n♂)、自然四倍体泥鳅鳍细胞中期分裂相染色体众数最高,分别为93.33%、90%、70%;25℃低渗处理40min,可以获得大量图像清晰、长度适中、分散良好、数目完整的染色体中期分裂相。2.不同倍性泥鳅染色体带型研究(1)Ag-NORs:自然二倍体泥鳅鳍培养的细胞染色体中期分裂相中Ag-NORs数为2对,正反杂交三倍体泥鳅(4n♀×2n♂、2n♀×4n♂)鳍培养的细胞染色体中期分裂相中Ag-NORs数为3对,自然四倍体泥鳅鳍培养的细胞染色体中期分裂相中Ag-NORs数为4对。(2)CMA3/DA/DAPI三重荧光染色:自然二倍体泥鳅鳍培养的细胞染色体中期分裂相中CMA3阳性位点为2对,正反杂交三倍体泥鳅(4n♀×2n♂、2n♀×4n♂)鳍培养的细胞染色体中期分裂相中CMA3阳性位点均为3对,自然四倍体泥鳅鳍培养的细胞染色体中期分裂相中CMA3阳性位点为4对。(4)Ag-NORs、CMA3/DA/DAPI荧光显带在染色体上的位置位于第1对中部着丝粒染色体(M1)的短臂末端,也就是核仁组织区的位置。综上所述,利用不同倍性泥鳅鳍培养的细胞可以达到活体制备染色体的目的,能得到连续的实验结果;对不同倍性泥鳅鳍细胞制备的染色体进行数目、核型和带型分析可以证实与体细胞基本无差异。因此,该实验建立的方法可以应用泥鳅的细胞遗传和分子遗传学研究中,提供重要的参考价值。
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