目的:本文的研究目的,运用16Sr DNA测序技术对中医心肝火旺证和心脾两虚的孤独症谱系障碍（ASD）儿童肠道菌群进行初步研究,并与健康儿童肠道菌群相对比,以期寻找出两者之间的差异菌群,为中医治疗提供理论基础。方法:本研究共纳入89例2-7岁儿童,包括2019年7月-2020年8月期间在西安市儿童医院就诊的47例确诊的ASD儿童,同时期同来源健康体检基本正常的健康儿童42例（健康对照组）,ASD组儿童按照中医辨证分为心脾两虚证26名、心肝火旺证21名。严格遵循无菌操作采集受试儿童晨起粪便200mg后提取粪便中DNA,应用16sr DNA基因的V3-V4可变区检测肠道菌群,通过OTU（Operational Taxonomic Units）聚类及分析,统计α多样性、β多样性、线性判别分析方法比较两组间差异。结果:1.对各组肠道菌群多样性比较,各样本内多样性及丰度（α多样性）有差异,但差异无统计学意义（P>0.05）;各样本间菌群多样性（β多样性）在各组间无明显差异（P>0.05）;2.在关键物种差异比较中,（1）门水平上,ASD组蓝藻菌门高于健康对照组,差异有统计学意义（P<0.05）,心脾两虚组疣微菌门比心肝火旺组高,差异有统计学意义（P<0.05）,ASD便秘组和健康便秘组相比关键物种无明显差异,ASD无便秘组比健康无便秘组蓝藻菌门、暂定菌种高,差异有统计学意义（P<0.05）。（2）纲水平上,ASD组厌氧菌纲多于健康对照组,差异有统计学意义（P<0.05）,心脾两虚组和心肝火旺组中,疣微菌纲和拟杆菌纲差异有统计学意义（P<0.05）,ASD便秘组和健康便秘组相比,Erysipelotrichia差异有统计学意义（P<0.01）,ASD无便秘组和健康无便秘组相比,杆菌纲差异有统计学意义（P<0.01）。（3）目水平上,ASD组、健康对照组相比,Selenomonadales差异性有统计学意义（P<0.01）,在心脾两虚组和心肝火旺组疣微菌目差异性有统计学意义（P<0.01）,ASD便秘组和健康便秘组中,丹毒丝菌目差异有统计学意义（P<0.01）,ASD无便秘组和健康无便秘组中,乳杆菌目、巴氏杆菌目、肠杆菌目差异有统计学意义（P<0.05）。（4）属水平上,ASD组和健康对照两组中,类杆菌属差异有统计学意义（P<0.05）,在心脾两虚组和心肝火旺组中拟杆菌属差异有统计学意义（P<0.05）,ASD便秘组和健康便秘组中,卵形拟杆菌、脆弱拟杆菌、单形拟杆菌属差异有统计学意义（P<0.05）,在ASD无便秘组和健康无便秘组中,属水平上菌群差异在统计学上无明显差异（P>0.05）。3.在物种标记物（LEf Se）分析中ASD组、健康对照组共发现了9个物种标记物,心脾两虚组、心肝火旺组有8个物种标记物,ASD便秘组和健康便秘组有12中物种标记物,ASD无便秘组和健康无便秘组有18种物种标记物。结论:本研究通过16Sr DNA的V3-V4可变区检测ASD中医心肝火旺证和心脾两虚两种证型以及ASD儿童与健康儿童的肠道菌群,取得了有意义的结果,这为进一步研究ASD发病及肠道菌群的关系以及分析不同中医证型的ASD奠定了基础。（1）ASD儿童与健康对照组相比a多样性和β多样性虽然无明显差异,但菌群结构存在差异,结构差异主要为蓝藻菌门、厌氧菌纲、Selenomonadales、类杆菌属。（2）心脾两虚组与心肝火旺组相比a多样性和β多样性无明显差异,菌群结构有差异,主要为疣微菌门、拟杆菌纲、疣微菌目、拟杆菌属差异明显。（3）ASD便秘组和健康对照便秘组中,在丹毒丝菌纲、丹毒丝菌目、卵形拟杆菌属、脆弱拟杆菌属、单形拟杆菌属有明显差异。（4）ASD无便秘组和健康无便秘组中,蓝藻菌门、暂定菌种、杆菌纲、乳杆菌目、肠杆菌目、巴氏杆菌目在两组中有明显差异。（5）ASD心脾两虚证和心肝火旺证是临床上常见的中医证型,疣微菌门和拟杆菌纲的差异或许为临床分辨中医证型提供一些依据。