不同猪鼻支原体菌株的检测分离和比较以及实验感染模型的初步研究

来源 :南京农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:baijiankai
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尽管支原体缺乏细胞壁,而且只有很小的基因组,但各属的支原体都能够引起不同宿舍的慢性感染。猪鼻支原体的较高感染性可能是由于猪的生长环境发生了变化,而更大程度上因为猪肉生产系统向专业化,集约化演变而导致。然而,猪鼻支原体是通过鼻子对鼻子来传播,通过感染猪的接触或谷仓、农场中的空气传播等。虽然M.猪鼻是猪的上呼吸道中正常菌群的一部分,但它具有致病性。它是关节炎,胸膜炎,心包炎和腹膜炎的病原体,并容易引起乳猪的地方性肺炎。大多数感染在亚临床和临床症状表现上可能有所不同,而且混合感染也很常见。菌株毒力的变化,天气的变化,还有病原体和宿主的免疫系统等这些机制都是系统性的。在基因组水平,有报道称不同牛群中分离出来的具有极大的异质性。在一个农场中的同一动物中分离出来的不同菌株,可能在毒力或引起干扰和交叉反应方面有所不同。在新陈代谢中,猪鼻支原体基因中的一些变化可以逃避宿主的免疫系统,这可能有助于其感染。目前的研究主要集中在从不同方面来控制猪鼻支原体。(1)猪病原体的检测主要是猪鼻支原体和猪肺炎支原体。临床样品为7-35天的猪鼻拭子,主要是来自中国的江苏省,他们从不同患病牛群中收集了病原体,利用巢式PCR (nPCR的)检测其DNA,检测后确定其为猪鼻支原体和猪肺炎支原体。实验结果表明,猪鼻支原体的患病率约为70.9%,而猪肺炎支原体的约13.5%。猪肺炎支原体和猪鼻支原体混合感染的鼻拭子样本为7.5%。(2)从检测到病原体的猪肺样品和来自不同屠宰场收集的典型肺炎肺部病灶分泌物中分离得到不同的猪鼻支原体菌株,这些分离株通过微生物培养和nPCR的鉴定,随后12个抗微生物剂做抗菌谱实验,对其进行鉴定。这些抗微生物剂属于不同的种属,通常用在养猪业的支原体控制上。(3)利用小鼠模型对分离株进行免疫原性试验,以期筛选出具有最高免疫原性的菌株。从接种不同猪鼻菌株的小鼠中制备抗原,利用ELISA原理,VlpA-G的重组蛋白做包被抗原,测定IgG抗体滴度在特定时间内的滴度。结果显示由100928F14诱导产生的IgG抗体抗体水平最高,其次是菌株11022402F16和11081111F15诱导产生的IgG。(4)致病性的研究模式具有挑战性。用不同猪鼻支原体的菌株感染无特定病原猪(SPF)的气管,了解猪鼻支原体的感染机制,并对其发病机理进行研究。用猪鼻支原体的培养物对肺组织进行诱导损伤,通过观察感染猪的临床症状和特异性病理变化,这个过程产生的微小病变可以利用苏木精和曙红(H&E)染色来观察。然而,此研究中发现了猪鼻和猪肺支原体的混合感染,这对于猪鼻致病特异性的是有影响的。随后,利用筛选出的致病性最高的菌株,按照标准化的剂量进行鸡胚接种实验。通过对鸡胚死亡率的观察,筛选出最高毒力菌株,从而为猪鼻支原体感染的研究奠定基础。本实验筛选到的最强毒株是11051207,其次是100928和11081111。本实验成功将不同猪鼻支原体菌株进行了分离检测,然后利用猪和鸡的胚胎研究其致病性,通过小鼠模型来检测其免疫原性。
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