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前言 胃癌是最常见的恶性肿瘤之一，虽然近年来在世界范围内胃癌患病率呈持续下降趋势，但在我国其死亡率仍居首位。而且由于受我国人均寿命的延长和人口老龄化的影响，目前胃癌患者的绝对数量仍在增加，严重地威胁着人民的生命和健康。 众所周知，胃癌的发生与环境因子和遗传因素密切相关。在环境因子中饮食因素尤为重要，尤其是N-亚硝基化合物，可在癌症形成过程的不同阶段影响癌发生的危险性。在癌的遗传因素中，癌的易感性问题是当前肿瘤研究的一个热点问题。由于细胞色素P4502E1（CYP2E1）是亚硝胺类化合物活化不可替代的代谢酶，且又受乙醇和亚硝胺的强烈诱导，因而CYP2E1与亚硝胺类相关癌症特别是胃癌的关系值得探讨。另外，在肿瘤的发生发展中，癌基因的激活和抑癌基因的失活起着十分重要的作用。p27Kipl基因是近年来发现的一个新的抑癌基因，其表达产物p27蛋白参与调控细胞周期和细胞凋亡，为细胞周期负性调节因子，其表达下调与肿瘤的进展和不良预后密切相关。 本研究把流行病学和分子生物学方法结合起来，从宏观和微观来综合评价环境因子和遗传因素对胃癌的发生及生物学行为的影响，分析可疑环境因素的作用及环境与基因的交互作用，为揭示胃癌的病因及早期发现和预防提供依据。 材料与方法 1．研究对象 病例选取2002年2月至2002年6月经中国医科大学附属第一医院肿瘤科确诊的原发性胃癌新病例 48名（其中男性 31例、女性17例，年龄范围：50－70岁X对照为沈阳市第二、第八人民医院普通外科同时期无消化道病史的非肿瘤患者48名（其中男性28例、女性20例，年龄范围：55－72岁人所有脱对象于人院次日清晨抽取外周血srnl，构椽酸钠抗凝，保存于一74t的深冻冰箱中，直至提取 DNA。 2．流行病学调查 按事先设计的调查表，逐一对病例和对照进行调查，内容包括：年龄、性别、民族等人口学指标及个人生活习惯、饮食情况、既往患病情况和家族史等其它指标。 3．实验方法 一万周血 DNA提取：采用水煮法。取抗凝血 0．5 nil，按 1：二比例加人裂解液0．Sllil，12000r／ndn离心沉淀白细胞，其上清中含有DNA，可用作PCR扩增的模板。用752分光光度计测DNA纯度在1·2－2·0之间，含量100－600ng／gl。4T保存备用。 p）CYPZEI Rsa位点基因型检测：根据文献合成引物，采用大连宝生物科技公司的合成引物。PCR反应总体积为50gi，其中含模板2pl，弓物各二…，4P卫dN TPTP，o．SUhq DNA聚合酶（2叫）以及相应的缓冲液。取PCR产物15一，加人10U Rsal瞩）和Zgl缓冲液，并加双蒸水至20…，充分混匀后于37℃保温12小时。2．2％琼脂糖凝胶（含0．sp矿nil i化乙锭）电泳，自动凝胶电泳成像分析仪上观察结果。纯合子野生型＊ CI可见 360hp条带，纯合子变异型CZCZ 为410hp 条带，杂合子CICZ 可见360hp 和410hp 条带。 o)胃癌组织 p27x‘”蛋白表达的检测：采用免疫组织化学方法瞩ABC法入细胞浆、胞核出现棕色颗粒为阳性细胞，参照SCOtt等方法，p27‘”’阳性细胞数＞25％判定为阳性。 4．统计分析 ·2· 采用 SPSS10．0统计软件包进行 X‘检验和非条件logistiC回归分析。 结 果 以可能影响胃癌发生、发展的环境因素和遗传因素作为自变量对是否患胃癌的应变量进行多因素非条件LogishC逐步回归分析，结果显示：食盐、香肠和熟食的过多摄人以及具有肿瘤家族史和＊等位基因作为胃癌的危险因素进人回归模型，而经常喝茶作为保护性因子可能降低胃癌的发生危险。 CYppEI基因 Rsa位点存在3种基因型，即基因型 A（l／CI）、基因型B（CI／CZ）和基因型 C（CZ．／CZ）。CYPZEIA人和 C 3种基因型在健康对照组中的构成比分别为 45．83％上7．92％和 6．25％，病例组 3种基因型的构成比分别为 68．8％在9．2％和 2．二院，两组构成比差别无统计学意义（X‘＝5．389，p＝0．068）。而病例组和对照组 CYPZEI基因 Rsa位点等位基因＊和 cZ的构成比分别为 83．3％J6．7％和 69．8％乃0．2％，其构成比差别具有统计学意义（X‘＝5．24，P＜0．05）。 对48例胃癌患者胃组织p27聊’蛋白表达的免疫组化检测发现：胃癌组织P27表达阳性率为43．8。％；低分化型、有淋巴结转移和浸润深度达浆膜层者的阳性表达率经统计学分析均显著低于（P＝0．030，P＝0．006，P二 0，037）高中分化型、无淋巴结转移和浸润深度末达浆膜层的胃癌患者。 讨 论 胃癌的发生与环境致癌物有关，然而，即使是在胃癌高发区，也只有少数人发生胃癌，提示在相似的暴露条件下，个体的易感性 ·3·在发病过程中具有重要作用。毒物代谢酶的遗传多态性与个体肿瘤易感性的关系是一个备受关注的研究领域。CYPZEI是代谢亚硝胺类化合物的重要代谢酶，个体CYPZEI活性差异可