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背景和目的:肝癌疾病在我国有很高的发生率和致死率,但其发病机制还不是很明确。极高的乙型肝炎病毒的伴随感染率是我国肝癌患者的重要特征,而其编码的乙肝病毒X蛋白(HBx)在肝癌发生发展中有丰富多样且自相矛盾的作用。在前期我们发现HBx在不同营养环境下对肝癌细胞株Hep G2凋亡的作用不同,因此我们推测营养环境会影响HBx在肝癌中的作用。本课题将进一步深入研究不同营养环境下HBx对肝癌细胞侵袭转移的差异性调节及其分子机制,并探索如何逆转HBx对肝癌侵袭转移的促进作用,抑制乙肝相关肝癌的转移。方法:1.收集临床乙肝相关肝癌病理组织标本,通过连续切片的免疫组化分析癌组织的营养微环境及其与肝癌转移能力的关系;2.在细胞水平,通过western blot、real-time PCR、Co-IP、侵袭、迁移实验,分析比较在营养充足和饥饿的环境下,HBx对肝癌侵袭转移的作用的差异,并深入探索SIRT3蛋白在这种差异性调节中的作用及HBx调节SIRT3蛋白表达的分子机制;同时通过细胞水平实验和裸鼠皮下成瘤、肝脏原位种植转移模型,验证SIRT3对肝癌生长和转移的作用;3.通过western blot、real-time PCR探索抗肝癌新药物,曲古菌素A,在饥饿环境下对HBx相关肝癌转移的作用及其机制;4.通过western blot、侵袭、迁移实验及细胞葡萄糖摄取量检测、ROS检测,探索通过改变细胞营养环境中葡萄糖的水平,使HBx发挥抑制肝癌转移的作用;并在小鼠肝脏原位种植转移模型上,通过提高肝脏葡萄糖摄取量,探索抑制乙肝相关肝癌转移的方法。结果:1.临床乙肝肝癌组织中不同区域的营养环境不一样,而且其中饥饿相关蛋白的表达水平与肝癌转移的标志物、SIRT3蛋白的表达水平相关;2.在细胞水平,HBx通过改变SIRT3蛋白表达水平实现在不同营养环境下对肝癌细胞侵袭转移的差异性调节;同时我们还发现SIRT3蛋白通过自噬途径降解,并且HBx通过调节SIRT3蛋白的降解调节SIRT3蛋白的表达水平;我们也证实了SIRT3发挥抑制肝癌侵袭转移的作用;3.曲古菌素A通过上调SIRT3 m RNA表达,逆转饥饿环境下HBx对肝癌转移的促进作用;4.极度提高营养环境中葡萄糖水平,可以使HBx抑制肝癌侵袭转移,并且在小鼠体内,通过极度提高肝脏葡萄糖摄取量,可以减少乙肝相关肝癌的转移。结论:1.HBx通过调节自噬途径相关的SIRT3蛋白降解,调节SIRT3蛋白表达水平,实现在不同营养环境下对肝癌侵袭转移的差异性调节;2.通过极度提高肝癌细胞的葡萄糖摄取量,可以使HBx发挥抑癌作用,并抑制乙肝相关肝癌的转移;3.曲古菌素A通过在转录水平上调SIRT3表达,抑制了饥饿环境下HBx相关肝癌的转移。