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目前在禽病中,大肠杆菌带来的疾病仍然很多,给各规模的养殖户都带来了经济损失,造成很多的困扰。近几年新发现的一种大肠杆菌的毒力岛ETT2(Escherichia colitypethree secretion system 2),全称为大肠杆菌三型分泌系2,约29.9kb大小。ETT2很有可能与大肠杆菌的进化和致病性有关,因此做好ETT2大肠杆菌的检测和分析,将有助于研究大肠杆菌中的致病性。本研究根据GenBank中发表的ETT2基因序列为参考序列,选择ETT2两端的ECs3703和ECs3737作为检测标志基因,建立Duplex PCR的检测方法。通过对65个养殖户样品的检测,发现其中存在ETT2+大肠杆菌感染的为48户(73.8%);144只病死禽中ETT2+为91只(63.2%);通过对252份临床样品的检测,发现其中ETT2+大肠杆菌感染为115份(45.6%);通过对437株禽源大肠杆菌临床分离株的检测,发现其中ETT2+大肠杆菌为227 株(51.9%)。为检测禽源大肠杆菌ETT2的基因类型,根据Genbank中的EEs3709、Ecs3712和Ecs3727基因序列,分别设计3对引物,同时参照文献合成了检测EEs3704-ECS3736基因的其余30对引物。以参考菌株S451524为阳性模板对照,以PCR的方法检测227株ETT2+大肠杆菌分离菌株的ETT2基因类型。结果显示禽源大肠杆菌ETT2可分为10个规律类型和其他无特殊规律类型;其中有规律的类型包括A型(12株)、C型(3株)、D型(2株)、E型(16株)、F型(1株)、L型(54株)、M型(4株)、O型(6株)、Q型(]1株)、P型(5株)和其他无特殊规律类型(113株)。为检测ETT2在禽源大肠杆菌基因组的整合位点,根据Genbank中发表的ETT2基因序列,以EEs3737为上游,glyU tRNA为下游设计PCR特异性引物。通过对227株ETT2大肠杆菌的检测,发现ETT2在禽源大肠杆菌基因组中整合到glyU tRNA位点的概率为59%(134 株)。为了解ETT与禽源大肠杆菌其他毒力因子是否存在相关性,该研究进一步对227株带有ETT2的大肠杆菌和210株不带有ETT2的大肠杆菌中进行了 F1菌毛、HPI毒力岛、PAP菌毛和LEE毒力岛的检测。结果发现在ETT2大肠杆菌中F1菌毛、HPI毒力岛、PAP菌毛和LEE毒力岛检出率分别为94.2%(214株)、36.9%(90株)、3.5%(8株)和13.7%(31株);而在不携带ETT2的大肠杆菌中的检出率分别为60%(127株)、9%(19株)、7.6%(16 株)和 5.7%(12 株)。