神经递质是脑内信息传递的物质基础,脑内神经元之间的信息传递主要依赖于突触间的神经递质释放。由于血脑屏障的存在,神经递质的获取相对于其他组织液(如血液,尿液)的获取要困难的多。微透析是一种活体取样技术,可以在清醒活动动物体内实时获取神经递质以及其他代谢产物。将末端带有透析膜的微透析探针植入动物体内,推动灌注液,细胞外液的神经递质依靠浓度梯度和灌注液进行物质交换从而被带出体外。微透析目前已经发展成为神经科学和药理学中重要的取样手段,和常规的组织匀浆分析以及活体谱分析相比较,微透析可以获取更有意义的细胞外液的组分。然而,该技术还存在很多难题,导致了其仍未大规模应用。例如,微量样品中低浓度神经递质的测定、不同探针之间的回收率校准等。由于这些难题的存在,目前绝大多数微透析应用的文献还局限在药理学的领域。本论文对微透析技术中常见的问题进行了解决和完善,使其更适用于神经科学的基础研究。具体包括以下部分：1微透析探针的校准。由于体外环境和体内环境的差别,微透析探针的体外校准测得的回收率很难用于衡量体内的探针回收率,因而,各种体内校准方法发展起来用于探针的校准,例如反透析法、低流速法、外推至零流速法、零净通量法等。然而,这些方法各有优缺点,如何在研究中选择合适的方法进行探针的校准是一个难题,该部分对常见的探针体内校准的方法和体外校准的方法进行了比较,并选择丘脑作为目标脑区测定了细胞外液的神经递质γ-氨基丁酸的浓度。2建立了一种同时测定五种氨基酸类神经递质(谷氨酸、天门冬氨酸、牛磺酸、甘氨酸、Y-氨基丁酸)的高效液相色谱方法,用于脑透析液中氨基酸神经递质的检测。采用邻苯二甲醛和亚硫酸钠柱前衍生,等度洗脱,五种氨基酸神经递质的分离在17分钟内完成。色谱柱为Agilent Eclipse Plus C18 (2×150 mm,粒径3.5μm),流动相为100 mM柠檬酸盐(pH 3.75),10%乙腈(V/V)。在0.10-15.00μM的浓度范围内线性良好,相关系数大于0.999,检测限4.4-17.2 fmol,回收率86.66%-103.42%.该方法成功应用于分析嗅球和前嗅核透析液中的氨基酸神经递质,并且通过反透析给药,研究了氯化钾和荷包牡丹碱(Y-氨基丁酸受体拮抗剂)对于嗅球氨基酸神经递质的影响。和其他文献中的方法相比,该方法分离快速、灵敏度高、操作简便,可用于体内的氨基酸类神经递质的连续监测。3和氨基酸的分析方法类似,将透析液用邻苯二甲醛和亚硫酸钠柱前衍生,衍生产物采用反向离子对色谱分离,电化学检测器检测,测定脑透析液中的神经递质组胺。衍生产物的分离在等度洗脱的模式下进行,色谱柱为Agilent Eclipse Plus C18 (3x150 mm,粒径3.5μm),流动相为100 mM磷酸钠(pH6),500mg/L OSA,20%甲醇(V/V)。该方法在2-50 nM的范围内线性良好,具有良好的重复性(相对标准偏差2.29%-6.04%),检测限为4.0 fmmol。利用探针的体内校准方法,该方法已成功地应用于测定大鼠下丘脑细胞外液的组胺浓度。4利用离子对色谱-电化学检测器建立一种高灵敏、快速的检测方法,用于脑组织中硫醇和鸟苷代谢物的同时测定。采用Agilent SB-AQ色谱柱,以100mM磷酸缓冲盐(pH 2.0,含350 mg/L辛烷基磺酸钠)：甲醇95：5(V/V)为流动相进行分离,检测电压为800 mV。所测的六种硫醇和鸟嘌呤类物质在15min内得到完全分离,且在测定浓度范围内线性良好。检出限为22.6-56.9 nM,不同浓度水平的加标回收率为94.4%-106.3%,变异系数为0.21%-3.85%。该方法可用于脑组织中硫醇和鸟嘌呤类物质的同时测定。5微透析液可以做为一种简单的样品前处理方法用于化妆品中美白成分的测定,采用微透析-液相色谱-电化学检测联用,建立了一种简单的方法用于亲水性美白成分(抗坏血酸糖苷、抗坏血酸磷酸酯镁、熊果苷、氢醌和曲酸)的同时测定。采用等度洗脱的模式,五种化合物在10 min内得到分离。该方法已成功地应用商业产品中美白化妆品中美白成分的分析。同时建立了在线微透析与零净通量联用的方法,用来测定商业产品中美白成分的分析以及评估样品基质对于回收率的影响。整个分离过程简单、快速、选择性高,可以作为商业化妆品中亲水性美白成分分析的常规方法。