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背景与目的乳腺癌是女性中最常见的恶性肿瘤,也是仅次于肺癌的第二大癌症死亡原因。三阴乳腺癌（Triple Negative Breast Cancer,TNBC）是乳腺癌中侵袭性和恶性程度最高的亚型,淋巴结转移率较高,中位生存期较短。因TNBC表面缺乏雌激素受体、孕激素受体和人表皮生长因子受体2等,难以找到治疗靶点,因此急需寻求治疗TNBC的分子靶点。长链非编码RNA（Long non-coding RNA,Lnc RNA）与肿瘤的进展密切相关。因此,从lnc RNA的角度阐明TNBC发生发展的机制有望成为攻克TNBC的一个新的突破点。本课题组前期对TNBC细胞MDA-MB-231、MDA-MB-436及乳腺正常上皮细胞MCF-10A进行lnc RNA测序分析（Lnc RNA sequencing,Lnc RNA-Seq）,经过数据筛选及分析,我们发现RGMB-AS1是在TNBC细胞及组织中高表达并且与TNBC患者的预后密切相关的lnc RNA。RGMB-AS1是一种与癌症有关的分子,RGMB-AS1可以通过与蛋白结合或者作为竞争性内源性RNA（competitive endogenous RNA,ce RNA）调控胃癌、肺腺癌、肝癌等多种癌症的进展。RGMB-AS1在TNBC中的表达及调控机制尚未可知。本课题将从以下三个方面探究RGMB-AS1在TNBC进展中的作用及调控机制:（1）探究RGMB-AS1在TNBC中的表达及其与临床病理学参数之间的关系;（2）明确RGMB-AS1对TNBC细胞增殖和侵袭迁移的影响;（3）探讨RGMBAS1通过与mi R-22-3p竞争性结合调控CCL2表达的分子机制。方法1探究RGMB-AS1在TNBC中的表达及临床意义通过数据库检测RGMB-AS1的表达与TNBC患者预后的相关性;通过原位杂交（in situ hybridization,ISH）检测RGMB-AS1在TNBC组织中的表达并分析其临床意义;通过实时荧光定量PCR（Real time-quantitative PCR,RT-q PCR）检测RGMB-AS1在TNBC细胞和MCF-10A细胞中的表达水平。2探究RGMB-AS1对TNBC细胞增殖、侵袭迁移以及EMT的影响2.1下调TNBC细胞中的RGMB-AS1后,通过CCK8实验、平板克隆形成实验及Transwell小室实验观察RGMB-AS1表达的变化对TNBC细胞的增殖和侵袭迁移能力的影响;通过蛋白免疫印迹法（Western blot,WB）检测TNBC细胞中上皮间充质转换（Epithelial mesenchymal transition,EMT）相关蛋白的表达变化;通过流式细胞术实验检测凋亡的变化。2.2上调TNBC细胞中的RGMB-AS1后,通过CCK8实验、平板克隆形成实验及Transwell小室实验观察RGMB-AS1表达的变化对TNBC细胞的增殖和侵袭迁移的影响;通过WB检测TNBC细胞中EMT相关蛋白的表达变化。3分析RGMB-AS1促进TNBC细胞增殖、侵袭迁移及EMT的分子机制3.1 RGMB-AS1在TNBC细胞中的定位通过核质分离实验及数据库在线预测RGMB-AS1在TNBC细胞中的具体定位。3.2 RGMB-AS1与mi R-22-3p之间的相互结合通过starbase v3.0数据库预测RGMB-AS1与mi R-22-3p的结合情况;通过双荧光素酶报告实验验证两者的结合作用;通过starbase v3.0数据库再次分析RGMB-AS1在BC（Breast Cancer）组织中与mi R-22-3p的相关性;通过RT-q PCR实验检测下调RGMB-AS1的表达对mi R-22-3p表达的影响。3.3 MiR-22-3p在TNBC中的表达通过starbase v3.0数据库检测mi R-22-3p在BC组织及健康人乳腺组织中的表达水平;通过RT-q PCR实验检测mi R-22-3p在TNBC细胞及MCF-10A中的表达水平。3.4 MiR-22-3p对TNBC细胞的增殖及侵袭迁移能力的影响下调或者过表达TNBC细胞中的mi R-22-3p后,通过CCK8实验、平板克隆形成实验及Transwell小室实验观察mi R-22-3p表达的变化对TNBC细胞的增殖和侵袭迁移的影响;通过WB检测TNBC细胞中EMT相关蛋白的表达变化。3.5 MiR-22-3p对RGMB-AS1介导的TNBC细胞增殖及侵袭迁移能力变化的影响通过拯救实验检测mi R-22-3p模拟物对RGMB-AS1的过表达介导的TNBC细胞增殖及侵袭迁移能力的影响。3.6 MiR-22-3p与CCL2 m RNA之间的相互结合通过starbase v3.0数据库在线预测mi R-22-3p与CCL2 m RNA的结合情况;通过RT-q PCR实验分析mi R-22-3p的表达变化对CCL2 m RNA表达的影响。3.7 CCL2与TNBC预后的关系通过GEPIA2数据库在线预测CCL2的表达对TNBC患者总体生存率的影响。3.8 RGMB-AS1/mi R-22-3p/CCL2之间的表达相关性通过RT-q PCR实验检测mi R-22-3p表达变化对CCL2 m RNA的影响,WB实验检测mi R-22-3p对RGMB-AS1介导的CCL2表达变化的回复作用。结果1 RGMB-AS1在TNBC中的表达及临床意义1.1 RGMB-AS1在TNBC组织和细胞中的表达均显著升高（P＜0.05）。1.2 TNBC组织中RGMB-AS1的高表达与患者的淋巴结转移、TNM分期、年龄及预后显著相关（P＜0.05）。2 RGMB-AS1促进了TNBC细胞的增殖、侵袭迁移及EMT的发生2.1下调RGMB-AS1的表达显著抑制了TNBC细胞的增殖、侵袭迁移及EMT的发生,促进了TNBC细胞的凋亡（P＜0.05）。2.2上调RGMB-AS1的表达显著促进了TNBC细胞的增殖、侵袭迁移及EMT的发生（P＜0.05）。3 RGMB-AS1调控TNBC细胞增殖和侵袭迁移的分子机制3.1 RGMB-AS1定位于TNBC细胞的细胞质中。3.2 RGMB-AS1与mi R-22-3p具有竞争性结合作用;下调RGMB-AS1的表达后,mi R-22-3p在TNBC细胞中的表达水平显著升高（P＜0.05）;而将mi R-22-3p表达上调后,RGMB-AS1在TNBC细胞中的表达水平显著降低（P＜0.05）。3.3 MiR-22-3p在MCF-10A细胞中的表达显著高于TNBC细胞（P＜0.05）,在BC组织中的表达低于正常乳腺组织。3.4 MiR-22-3p的表达下调显著促进了TNBC细胞的增殖、侵袭迁移及EMT的发生（P＜0.05）;而mi R-22-3p的表达上调显著抑制了TNBC细胞的增殖、侵袭迁移及EMT的发生（P＜0.05）。3.5 MiR-22-3p对RGMB-AS1介导的TNBC细胞增殖及侵袭迁移能力的增强具有显著的回复作用（P＜0.05）。3.6 MiR-22-3p与CCL2 m RNA具有靶向结合位点;mi R-22-3p的表达下调显著增强CCL2 m RNA在TNBC细胞中的表达（P＜0.05）;mi R-22-3p的表达上调显著降低CCL2 m RNA在TNBC细胞中的表达（P＜0.05）。3.7 CCL2的高表达与TNBC患者的预后不良相关（P＜0.05）。3.8 MiR-22-3p模拟物可以逆转RGMB-AS1过表达介导的TNBC细胞中CCL2 m RNA和蛋白水平的表达增加（P＜0.05）。结论1 RGMB-AS1在TNBC的组织和细胞系中均高表达,其高表达与TNBC患者的年龄、TNM分期、淋巴结转移及预后相关。2 RGMB-AS1通过与mi R-22-3p结合上调CCL2的表达,从而促进TNBC细胞的增殖和侵袭迁移。