Pou4f2/Brn3b-GFP基因敲入小鼠模型分析

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哺乳动物眼睛是感受外界光信号的器官,光信号经视网膜转换,整合成电信号传递给大脑。哺乳动物视网膜由超过60种不同的神经元组成,这些不同的细胞类型可归纳为6类神经细胞和1类胶质细胞。由于视网膜的结构清晰,细胞种类多,生理功能研究较为清楚,是研究中枢神经系统发育很好的模型。之前有研究报道POU-IV家族转录因子Pou4f2(Brn3b)在小鼠视神经节细胞发育起始阶段开始表达, Pou4f2敲除的小鼠缺失了大约70%的视神经节细胞。缺失Pou4f2会导致视神经节细胞的轴突投射不能正常形成,并引起视神经节细胞凋亡。为了继续深入研究转录因子Pou4f2参与调控下游基因,本课题设计将GFP编码序列插入到Pou4f2编码区的5’端,构建表达Pou4f2-GFP融合蛋白的Pou4f2-GFP基因敲入小鼠模型。通过分析对比Pou4f2在野生型小鼠视网膜中表达和Pou4f2-GFP在Pou4f2-GFP基因敲入小鼠视网膜的表达,发现Pou4f2-GFP小鼠Pou4f2-GFP的表达模式与野生型小鼠Pou4f2的表达一致。Pou4f1和Isl1在Pou4f2-GFP纯合子小鼠视网膜的表达模式与野生型一致。以anti-GFP抗体共沉淀染色体,其ChIP-PCR结果显示通过anti-GFP抗体共沉淀染色体可以找到Pou4f2的下游靶基因, Shh和Isl2。Pou4f2-GFP小鼠胚胎期的视网膜表达可直接观测到的GFP,表明Pou4f2-GFP小鼠模型同时可用于研究诱导定向分化视神经节细胞的模型。
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