【摘 要】
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目的:构建针对炎症的体内动物模型结合炎症因子含量检测分析,筛选古钩藤抗炎有效部位;对古钩藤抗炎主要有效部位进行指纹图谱分析;测定乙酸乙酯部位中绿原酸、咖啡酸2种酚酸类成分的含量;采用液质联用技术和传统的分离纯化方法对古钩藤石油醚和乙酸乙酯部位进行化学成分分析。方法:1.采用系统溶剂法将古钩藤75%乙醇提取物进行部位分离,建立二甲苯致耳肿胀及棉球致肉芽肿模型,测定古钩藤不同极性部位对急、慢性炎症的抑
【基金项目】
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广西高校中青年教师科研基础能力提升项目（项目批准号:2019KY0324）；
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目的:构建针对炎症的体内动物模型结合炎症因子含量检测分析,筛选古钩藤抗炎有效部位;对古钩藤抗炎主要有效部位进行指纹图谱分析;测定乙酸乙酯部位中绿原酸、咖啡酸2种酚酸类成分的含量;采用液质联用技术和传统的分离纯化方法对古钩藤石油醚和乙酸乙酯部位进行化学成分分析。方法:1.采用系统溶剂法将古钩藤75%乙醇提取物进行部位分离,建立二甲苯致耳肿胀及棉球致肉芽肿模型,测定古钩藤不同极性部位对急、慢性炎症的抑制率;采用Elisa法检测古钩藤不同极性部位对小鼠血清中TNF-α、IL-2细胞因子表达水平的影响。2.采用UPLC法,利用相似度分析、CA和PCA等方法,建立古钩藤石油醚和乙酸乙酯部位的指纹图谱。3.采用UPLC法,以绿原酸和咖啡酸为测定指标,对古钩藤乙酸乙酯部位建立含量测定方法。4.采用UPLC-Q-Exactive液质联用技术,对古钩藤抗炎主要有效部位进行化学成分分析。5.通过试管法和圆形滤纸法对古钩藤地上部分化学成分进行系统预试验。并采用硅胶柱层析,重结晶等方法对石油醚和乙酸乙酯部位化学成分进行分离纯化,利用EI-MS、~1H-NMR、13C-NMR等波谱方法,结合理化性质对分离得到的单体化合物进行结构鉴定。结果:1.古钩藤各极性部位对以二甲苯和棉球为致炎物质的动物模型均有不同程度的抑制作用,并呈一定的量-效关系,其中石油醚和乙酸乙酯部位抑制率最高,且古钩藤不同极性部位均能降低血清中TNF-α含量,升高IL-2水平。2.古钩藤石油醚部位指纹图谱共标定17个共有峰,相似度在0.829～0.963;乙酸乙酯部位指纹图谱共标定15个共有峰,相似度在0.962～0.988;且CA、PCA结果显示,10批样品中石油醚部位可分为5类,乙酸乙酯部位分为2类。3.10批古钩藤乙酸乙酯部位样品中绿原酸的含量在4.27～39.84mg·g-1范围内,咖啡酸的含量在1.24～5.83 mg·g-1范围内。4.采用高分辨液质联用技术对古钩藤抗炎有效部位进行了化学成分分析,初步推测出古钩藤石油醚和乙酸乙酯部位中可能含有芦丁、槲皮素、木犀草素、咖啡酸、绿原酸、原儿茶酸、十二烷二酸、壬二酸、黄体酮和香兰素等10个化合物。5.古钩藤化学成分系统预试验结果表明古钩藤可能含有黄酮类、蒽醌类、酚类、香豆素、内酯、强心苷、植物甾醇、三萜类、生物碱类及氨基酸、多肽、蛋白质、糖、多糖及其苷类、鞣质、有机酸类及油脂等成分。且从古钩藤乙醇提取物中分离得到5个化合物,分别鉴定为豆甾醇（1）、羽扇豆醇（2）、正十五烷酸（3）、β-胡萝卜苷（4）、3-乙酰氧基齐墩果酸（5）.结论:本文研究结果确定了古钩藤石油醚和乙酸乙酯部位可能为其体内抗炎作用的主要有效部位,通过减少炎症因子TNF-α的释放,提高IL-2的含量来发挥抗炎作用;采用UPLC法所建立的石油醚和乙酸乙酯部位指纹图谱方法和相关成分的含量测定方法稳定、结果可靠,重复性良好,可用于古钩藤药材的质量控制;UPLC-Q-Exactive高分辨液质联用技术从古钩藤石油醚和乙酸乙酯部位中快速鉴定出10个化合物,主要为黄酮类和酚酸类;从古钩藤中分离鉴定出5个化合物,均首次从古钩藤中分离得到,为古钩藤抗炎药效物质基础提供理论依据。
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