合欢花黄酮对MK801诱导的精神分裂症模型大鼠学习能力的影响及其机制研究

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研究背景精神分裂症是一种病因复杂的重性精神疾病而且其发病机制尚末完全阐明。该病多发病于青壮年,同时常伴有感知、情感、行为、思维等方面的障碍。该病病程和进展缓慢,复发率和病残率也都比较高。近年来发现黄酮类化合物对中枢神经系统具有显著保护作用,可以改善神经精神疾病的生理机能、调节内环境稳定,从而提高抗精神病药物的疗效。然而其对神经精神系统的作用机理尚需进一步研究,为研究精神分裂症的发病机制和治疗方法提供依据。目的利用非竞争性N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体拮抗剂地卓西平马来酸盐(MK-801)制备大鼠精神分裂症模型。研究合欢花黄酮对精神分裂症模型大鼠学习认知能力的干预作用,并检测合欢花黄酮对模型大鼠海马组织中S100-β、c-Fos蛋白分子表达的影响,探讨其参与精神分裂症的分子机制。方法1.实验分组:随机分为四组,每组10只,分别为正常组(Control)、模型组(Model)、氟哌啶醇组(HLA)、合欢花黄酮组(FAF)。2.模型构建及干预:Control组与Model组灌胃生理盐水,HLA组灌胃氟哌啶醇(2mg/kg), FAF组灌胃合欢花黄酮(60mg/kg)单位体重给药,1次/d,连续给药28d后,Model组、HLA组、FAF组分别于腹腔注射0.6mg/kg MK-801, Control组腹腔注射等体积生理盐水,均连续注射3天建立模型。于第4d进行Morris水迷宫实验,评价模型是否成功的标准。3.Morris水迷宫测试对Control组、Model组、氟哌啶醇组(HLA)、合欢花黄酮组(FAF)造模后大鼠行水迷宫测试。采用Morris水迷宫视频分析系统进行信息处理。通过定位航行实验及空间探索实验判定大鼠的学习能力。4.相关蛋白表达及定位的检测:水迷宫实验结束24h后,4%多聚甲醛灌注取出海马组织。免疫组化和免疫荧光法对以上各组模型海马组织中S100-β、c-Fos蛋白进行定量、定位分析,观察S100-β、c-Fos蛋白表达情况。Western blot检测各组海马内S100-β、c-Fos蛋白质的表达水平。5.统计分析:应用SPSS18.0统计软件分析,数据均经方差齐性检验,以均数士标准差形式表示,多个样本均数比较采用One-way ANOVA检验,P<0.05为差异有显著性。结果1.逃避潜伏期检测:Control组大鼠的逃避潜伏期最短,学习记忆能力最强;与Control组比较,Model组、HLA组、FAF组逃避潜伏期均延长,HLA组、FAF组大剂量大鼠的逃避潜伏期较Model组大鼠明显缩短,差异有统计学意义(分别为p<0.05和p<0.01);HLA组、FAF组大鼠的逃避潜伏期差异无统计学意义(p>0.05);2.空间记忆检测:Control组大鼠穿越平台次数最多,空间记忆能力最强;与Control组比较,Model组、HLA组、FAF组大鼠穿越平台次数均减少,HLA组、FAF组大鼠穿越平台次数较Model组大鼠明显增多,差异有统计学意义p<0.01);HLA组、FAF组大鼠穿越平台次数差异无统计学意义(p>0.05)。3.免疫组化:Control组仅见少量S100-β、c-Fos阳性细胞;Model组,S100-β c-Fos蛋白表达较多,与Control组相比差异有统计学意义(p<0.01); HLA组、FAF组S100-β、c-Fos阳性细胞表达较Model组有所减少(p<0.01)。HLA组与FAF组之间的S100-β、c-Fos阳性细胞表达差异无统计学意义(p>0.05)。4.免疫荧光:Control组绿色荧光细胞数明显少于Model组,差异有统计学意义(p<0.01)。HLA组、FAF组海马中可见绿色荧光,但与Model组相比,细胞数减少,差异有统计学意义(p<0.01)。HLA组、FAF组之间差异无统计学意义(p>0.05)。5. Western blot:Control组中S100-β、c-Fos蛋白表达处于较低水平,Model组中S100-β、c-Fos蛋白表达水平较Control组均明显升高,差异有统计学意义(p<0.01);HLA组、FAF组中S100-β、c-Fos蛋白表达较Model组有所降低,差异具有统计学意义(P<0.01); HLA组、FAF组中S100-p, c-Fos蛋白表达未见明显差异,无统计学意义(p>0.05)。结论1.合欢花黄酮具有一定的神经保护作用,能改善精神分裂症模型大鼠的认知缺陷;2.合欢花黄酮下调精神分裂症模型大鼠海马细胞中S100-p. c-Fos蛋白的表达可能是其神经保护的作用机制之一。
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