微调三号方对大肠癌炎性微环境影响的实验研究及其联合SOX方案的临床研究

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目的通过对肿瘤相关巨噬细胞(TAM)的研究,寻找中药微调三号方(WD-3)在TAM中各关键环节中的作用靶点,从而阐明WD-3对大肠癌肿瘤炎性微环境的作用及机制;观察WD-3联合SOX方案治疗Ⅲ/Ⅳ期大肠癌,对患者的T细胞亚群免疫环境、肿瘤免疫标志物的影响,体力状况、临床症状及化疗毒副反应的作用。方法通过共培养体系,检测各组巨噬细胞中M1型及M2型标致分子及巨噬细胞上TLR2及TLR4受体的表达;ELISA法检测各组培养上清中Thl、Th2型细胞因子,促炎细胞因子IL-8、TNF-α,生长因子VEGF、EGF,转化生长因子-p(TGF-p),基质金属蛋白酶MMP-9的表达;检测共培养后各组大肠癌细胞的侵袭能力;检测癌细胞蛋白酶活性;40例Ⅲ/Ⅳ期大肠癌患者随机分为对照组(单纯SOX方案)和治疗组(WD-3+SOX方案),观察两组患者治疗后T细胞亚群免疫环境、肿瘤标志物、体力状况、临床症状及化疗毒副反应的变化,并统计分析两组在上述指标方面的差异。结果本实验研究发现,与IL-4刺激组相比,WD-3刺激组的巨噬细胞表型以M1型为主,TLR2、TLR4的表达显著下降(P<0.01);WD-3刺激组的IL-2表达水平明显上升(P<0.01),IL-4、IL-7表达水平上升(P<0.05),IL-6、IL-10表达水平较明显下降(P<0.01);WD-3刺激组的IL-8、VEGF、TGF-p表达水平显著下降(P<0.01), EGF、MMP-9表达水平下降(P<0.05)。WD-3刺激组的CT26穿过Transwell膜的数量较其他两组明显减低,差异有统计学意义(P<0.01)。与IL-4刺激组相比,WD-3刺激组CT26细胞的蛋白酶活性水平的差异有统计学意义(P<0.05)。临床研究发现,治疗组治疗后与治疗前及与对照组相比,CD3+、CD4+、CD4+/CD8+值均明显升高(P<0.01),并且治疗组能降低肿瘤标志物水平、改善体力状况,同时在缓解临床症状及减轻化疗毒副反应方面优于对照组,经比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论WD-3有调节TAM的不同亚型,抑制TLR2、TLR4的表达;纠正大肠癌炎性微环境中Thl、Th2型细胞因子的失衡状态;抑制IL-8的表达,抑制TGF-β的生成,下调VEGF、EGF,减少MMP-9的分泌;降低大肠癌细胞的侵袭能力,抑制大肠癌细胞的蛋白酶活性的作用。WD-3联合SOX方案治疗Ⅲ/Ⅳ期大肠癌患者能够提高患者细胞免疫功能、降低患者肿瘤标记物水平、提高患者体力状况、改善患者临床常见症状及减轻化疗毒副反应。
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