中国前列腺癌患者中XMRV病毒的检测及Partin表的临床应用研究

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背景XMRV是在前列腺癌中发现的一种新的鼠源性逆转录病毒,在前列腺癌基质细胞及上皮细胞均有表达,和前列腺癌的恶性程度有关,恶性程度越高,XMRV感染率就越高。但最近一系列研究认为XMRV感染可能是实验室污染所致。国内XMRV和前列腺癌的研究尚是空白。近年来中国前列腺癌患者增长迅速,特别是早期需行手术根治的患者,增长尤为明显。但目前在临床上检查术前还不能正确判断前列腺癌的病理分期,迫切需要找到一个好的前列腺癌病理分期的预测工具,能够正确预测出患者的病理分期,使病人受到相应最合适的治疗。Partin表是国际上最受欢迎,应用最广的前列腺癌病理分期的预测工具。目前已有3个版本,分别是1997、2001及2007版本。由于地域人种的差异,生物学行为及诊断治疗模式的不同,中国的前列腺癌发病的情况和美国明显不同,Partin表能否适用于中国前列腺癌患者,目前还没有答案。本研究将鉴定国人前列腺癌患者中是否存在着XMRV感染,以及这种感染和前列腺癌有否相关性。此外,我们还将通过受试者工作曲线来验证3个版本的Partin表是否适用于中国的前列腺癌患者,及哪个版本最适合。材料和方法:于2009年3月至2012年9月获取了189例前列腺癌患者的样本(包括组织样本和血液样本),均取自浙江大学医学院附属第二医院泌尿外科,其中血液样本189例,有119例患者同时获取前列腺手术组织样本,均有病理证实为前列腺癌。血液样本收集后置于4℃冰箱保存,组织样本收集到后置于-80℃保存,正常组对照样本总计251例,均为男性血液样本,均取自健康体检者。所有样本都在24小时内完成相关的核酸(DNA和RNA)提取,PBMCs和血浆分离等操作。对前列腺癌患者及对照组的血液样本,我们用巢式PCR检测了XMRV的所有样本的5’gag leader region, gag或env序列的表达,阳性的血浆样本分别与LnCap细胞系共培养后,提取LnCap的DNA和RNA进行PCR检测,用Western Blot检测XMRV的pg70蛋白,同时对阳性血浆标本的PBMCs用PCR检测XMRV。并对这些阳性标本用测定线粒体细胞色素氧化酶序列的来判断有无实验室鼠源性污染的存在。对其中119例行前列腺癌根治术的患者,加上2000-2008年期间39例患者资料(共158例),根据其临床资料,通过受试者工作曲线来验证3个版本的Partin表能否准确预测前列腺癌病理分期。结果:PCR在前列腺癌标本中检测到了5个血浆样本检测到了XMRV的5’gag leader region, gag或env序列,所有的组织样本均为阴性;对照组有10例阳性。未检测到全长XMRV基因组。对于阳性的血液样本,我们分别用Western blot、与LinCap细胞系共培养来检测是否有病毒蛋白或者活病毒颗粒,但检测所有样本均为阴性。在15个阳性样本中总计检测出3个样本有污染(对照组3个),总体污染率为20.0%。1997版本、2001版本及2007版本的Partin表预测本组病例包膜局限的ROC曲线的AUC分别是0.877、0.788、0.788,包膜侵犯的AUC分别是0.525、0.615、0.608,精囊侵犯的AUC分别是0.875、0.649、0.820,盆腔淋巴结转移的AUC分别是0.808、0.758、0.735。结论:在中国前列腺癌患者中未发现明确的XMRV病毒感染,但存在着MLV-like的相关鼠源病毒,且在血液中为以基因片段的形式存在。MLV-like的相关鼠源病毒与前列腺癌没有相关性。XMRV的研究中确实存在着实验室鼠源性污染的可能性。除了2001版在预测精囊侵犯方面稍差外,3个版本的Partin表预测前列腺癌包膜局限、精囊侵犯及淋巴结转移的准确性都不错,但是在预测包膜侵犯方面均不理想,这可能和国内病理部门处理前列腺癌标本不够规范有关。1997版的Partin表在预测包膜局限显著好于2007,预测精囊侵犯显著好于2001版。相对旧的版本,2007版本Partin表并没有表现出优越性。
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