【摘 要】
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研究目的:胃癌是我国消化系统常见恶性肿瘤,肿瘤新生血管的形成在其发生发展的过程中发挥了重要的作用。滋阴化痰方为我科实践中用于晚期胃癌患者的临床有效方药,我们前期实验研究证实,抗血管生成是其发挥作用的主要途径之一,但其上游调控机制尚不清楚。近年来许多研究表明,肿瘤细胞外泌体作为肿瘤细胞间通讯和信息交换的生物载体,在肿瘤发生发展中发挥重要作用。本研究旨在探讨滋阴化痰方是否通过调节胃癌外泌体发挥其抑制胃
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研究目的:胃癌是我国消化系统常见恶性肿瘤,肿瘤新生血管的形成在其发生发展的过程中发挥了重要的作用。滋阴化痰方为我科实践中用于晚期胃癌患者的临床有效方药,我们前期实验研究证实,抗血管生成是其发挥作用的主要途径之一,但其上游调控机制尚不清楚。近年来许多研究表明,肿瘤细胞外泌体作为肿瘤细胞间通讯和信息交换的生物载体,在肿瘤发生发展中发挥重要作用。本研究旨在探讨滋阴化痰方是否通过调节胃癌外泌体发挥其抑制胃癌血管生成作用。研究方法:1、以人胃癌SGC-7901和MGC-803细胞为实验材料,与两种不同剂量的滋阴化痰方共培养48小时,使滋阴化痰方主动进入细胞外泌体。收集细胞上清液,提取外泌体。透射电镜下观察细胞外泌体的形态,Western blot检测外泌体膜表面标志性蛋白TSG101和CD81,用纳米颗粒跟踪分析仪Nano Sight分析外泌体粒径大小分布;2、用PKH67标记外泌体,与HUVECs共培养,共聚焦显微镜观察HUVECs对外泌体的摄取;3、目的通过体外基质胶实验,观察滋阴化痰方调控外泌体对HUVECs管状结构形成的影响;4、用q-PCR法,检测VEGFA、VEGFC、FOXO1、C-MYB在HUVECs中的表达水平。5、观察滋阴化痰方调控外泌体对裸鼠胃癌模型肿瘤生长及微血管密度的影响,免疫组化检测肿瘤组织VEGF、b FGF、IL-12和IFN-α的表达水平。结果:1、从胃癌细胞上清中提取的外泌体为圆形或卵圆形的膜泡,形态一致,表达标记蛋白TSG101和CD81,粒径为30～200 nm;2、共聚焦显微镜显示HUVECs可吸收外泌体;3、在体外Matrigel胶成管实验中,随着外泌体浓度的增加,ZYHT-H-MGC-803-Exos组和ZYHT-H-SGC-7901-Exos组的细胞成管分支长度明显低于空白对照组（PBS组）和外泌体对照组（MGC-803-Exos组与SGC-7901-Exos组）的细胞成管分支长度;4、q-PCR检测结果表明,ZYHT-H-Exos组HUVECs细胞中VEGFA、VEGFC表达明显低于空白对照组（PBS组）和外泌体对照组,FOXO1、C-MYB的表达则高于空白对照组（PBS组）和外泌体对照组;5、裸鼠体内实验结果表明,ZYHT-H-MGC-803-Exos组的裸鼠皮下瘤体积明显小于空白对照组（PBS组）和外泌体对照组;6、免疫组织化学法分析结果表明,ZYHT-H-MGC-803-Exos组裸鼠皮下瘤组织中VEGF、b FGF表达低于空白对照组（PBS组）和外泌体对照组,IL-12和IFN-α表达则高于空白对照组（PBS组）和外泌体对照组。结论:1、滋阴化痰方能够调控外泌体抑制胃癌血管新生,该作用可能与其调控外泌体抑制VEGFA和VEGFC,促进FOXO1和C-MYB表达有关。2、滋阴化痰方能够调控外泌体抑制胃癌小鼠肿瘤生长,该作用可能与其调控外泌体抑制胃癌小鼠VEGF、b FGF表达,促进IL-12和IFN-α表达有关。
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