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烟草黑胫病（Phytophthora nicotianae）是烟叶生产上最重要的病害之一，主要发生在我国南方，对烟叶生产构成严重威胁。该病菌可侵染多种茄科植物，以病残体形式在土壤中越冬存活。为深入了解烟草黑胫病菌的发生和变异规律，并为科学防治该病害提供理论基础，本文采用选择性培养基从采自全国各地的烟草黑胫病样品中分离获得了大量菌株，并采用分子生物学方法，对其分子遗传变异规律进行了系统研究。本文主要开展了如下四方面的研究工作：1.本试验采用选择性培养基，以胡萝卜琼脂培养基为基础培养基，对寄自全国各地的疑似烟草黑胫病茎秆标本进行病菌分离。通过多次改良选择性培养基的药物配方试验，最后在胡萝卜琼脂培养基CA的基础上，研制出了适于烟草黑胫病菌分离的有效培养基，其药物配方为：利发霉素10㎎(100%，上海生工生物工程有限公司)，氨苄西林5㎎(100%，香港联邦制药厂有限公司)，五氯硝基苯5㎎(20%，山西绿海农药科技有限公司)，多菌灵5㎎（60%，山东淄博恒生农药有限公司），链霉素0.35㎎(100%，上海生工生物工程有限公司)。采用该培养基可有效抑制其他霉菌和细菌的生长，从而利于成功分离烟草黑胫病菌。2.采用3种菌丝破壁方法与3种试剂提取方法相结合的9种方法，比较研究了烟草黑胫病菌菌丝基因组DNA的提取方法。结果表明，采用液氮研磨+CTAB/SDS提取法、液氮研磨+EZ-kit提取法和电钻研磨+EZ-kit提取法获得的基因组DNA经琼脂糖凝胶电泳和EF-1α-PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳检测品质较好。在此基础上，利用ISSR引物UBC#808对三种待测DNA样品进行PCR扩增，证明上述3种方法提取的基因组DNA适合于ISSR反应。3.采用28s rRNA和β-tubulin基因序列分析方法，对来自全国各地的烟草疫霉代表菌株进行测序分析。结果表明，供试菌株的28s rRNA序列差异较小，相似度较高，聚类结果可为两个群。供试菌株得到的β-tubulin基因序列与NCBI的序列比对，相似度为99%，确定其分类地位。4.采用SRAP和RAPD两种分子标记方法对分离自我全国各地的140株烟草疫霉菌株的遗传多样性进行了分析，结果发现遗传图谱差异非常小，表明我国烟草疫霉菌遗传稳定。