论文部分内容阅读
目的: 构建脱氢表雄酮（DHEA）诱导的SD雌性大鼠多囊卵巢综合征（PCOS）动物模型，分析Th17/Treg平衡失调与PCOS的关系，并观察IL-6、TGF-β1等相关细胞因子的水平变化，探讨Th17/Treg平衡失调在PCOS发病中的分子机制及意义。 方法： 1.选取21日龄断奶的SD雌性大鼠20只，随机分组为模型组和对照组，每组各10只，皮下注射DHEA构建大鼠PCOS模型：DHEA6mg/100g体重+0.2ml注射无菌注射用大豆油剂×30天，对照组于同时间皮下注射无菌注射用油剂。采用以下方法验证模型：称量大鼠体重、双侧卵巢重量；检测血清激素水平，包括血清睾酮（T）、雌二醇（E2）、卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）、LH/FSH；HE染色方法观察大鼠卵巢组织结构变化。 2.用流式细胞仪检测大鼠外周血辅助性T细胞17（Th17）、调节性细胞T细胞（Treg）占CD4+淋巴细胞的比例，并计算Th17/Treg比值。 3.酶联免疫吸附法（ELISA）分别检测大鼠外周血清细胞因子IL-6、TGF-β1的水平。 4.采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测PCOS组与对照组卵巢组织IL-6mRNA、TGF-β1 mRNA的转录,并通过凝胶图像分析系统对相关产物进行半定量分析。 5.采用Western-Blotting检测卵巢组织中IL-6、TGF-β1蛋白表达水平。 结果: 1.模型组大鼠体重略高于对照组（238.11±23.53 vs231.83±14.37），模型组大鼠卵巢相对重量略高于对照组（82.19±10.63 vs71.27±15.00），但差异无统计学意义（P＞0.05）。模型组大鼠血清T（35.18±7.66 vs2.78±1.53）、LH（96.23±21.33 vs5.57±3.88）、LH/FSH（2.23±1.94 vs0.06±0.04）较对照组显著升高（P＜0.01）；模型组血清E2水平较之对照组略升高（170.35±44.33 vs167.22±55.36），血清FSH水平较之对照组略降低（77.36±69.62 vs798.22±328.13），但差异均无统计学意义（P＞0.05）。卵巢切片HE染色显示：PCOS模型组卵巢有较多不规则的囊状扩张卵泡及闭锁卵泡，不同发育阶段卵泡及黄体数目明显减少，颗粒细胞数减少。对照组可见不同发育阶段的卵泡及多个黄体，颗粒细胞层数减少。 2.模型组大鼠外周血中Th17细胞占CD4+T淋巴细胞的百分比较之对照组明显升高（4.31±2.68 vs1.16±0.28；P＜0.01）。模型组大鼠外周血中Treg细胞占CD4+T淋巴细胞的百分比较之对照组无明显差异（2.28±1.04 vs2.27±1.55；P＞0.05）。模型组大鼠外周血中Th17/Treg比率较之对照组明显升高（2.35±1.98 vs0.63±0.22；P＜0.01）。模型组大鼠外周血CD3+CD4+T细胞比例较之对照组显著降低（56.66±10.57 vs59.95±6.37；P＜0.01）。 3.模型组外周血IL-6表达水平较之对照组显著升高（395.60±31.87 vs384.40±59.12；P＜0.05）；模型组外周血TGF-β1表达水平较之对照组降低（23310.58±5421.93 vs24993.41±7241.00），但差异无统计学意义（P＞0.05）。 4.模型组大鼠卵巢组织IL-6mRNA相对表达量显著高于对照组（2.89±2.50 vs1.33±0.85；P＜0.01）。模型组大鼠卵巢组织TGF-β1mRNA相对表达量较之对照组无显著差异（1.04±0.55 vs1.11±0.56；P＞0.05）。 5.模型组卵巢组织中IL-6蛋白表达水平较之对照组无显著差异（0.35±0.16 vs0.35±0.20；P＞0.05）。模型组卵巢组织中TGF-β1蛋白表达水平低于对照组，差异无统计学意义（0.23±0.10 vs0.41±0.14；P＞0.05）。 结论: 1.本实验采用DHEA诱导的SD大鼠PCOS动物模型出现了与PCOS患者相似的卵巢病理组织学及性激素水平变化，提示该模型是一种较为理想的PCOS动物模型。 2.PCOS疾病中存在Th17/Treg平衡失调而且倾向于Th17介导的促炎状态，并与IL-6、TGF-β1等相关细胞因子关系密切，这表明Th17/Treg平衡调节机制可能参与了PCOS疾病的发生发展。