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文殊兰(Crinum asiaticum var.sinicum(Roxb.ex Herb.)Baker),为石蒜科(Amaryllidaceae)文殊兰属(Crinum)多年生草本植物。我们国家许多地区均产文殊兰,它以优美的形态出名,广泛的作为一种观赏型植物。文殊兰是在民间经常用于治疗外伤、昆虫和蛇咬的一类具有前途的中草药。文殊兰含有丰富的化学成分,其中的石蒜碱是近年来研究的较多的一种生物碱。许多学者发现,石蒜碱诱发肿瘤细胞凋亡一个方面是通过线粒体途径使某些蛋白表达异常导致的,另一方面是通过内质网途径诱导的。但对于文殊兰其他生物碱研究还处在空缺阶段,目前有文献报道在抗肿瘤实验中发现文殊兰氯仿提取物可能通过改变细胞周期的某些蛋白表达异常或者细胞周期的某一期的阻滞诱导细胞凋亡来抑制NCI-H460细胞生长。这些工作为抗癌新药的发展提供了一定的实验和理论依据,同时也为本课题文殊兰弱碱性生物碱抗肿瘤活性提供理论基础。因此本实验研究文殊兰种子中乙醇提取物乙酸乙酯部位的弱碱性生物碱的抗肿瘤活性,并对其抗肿瘤机制进行初步探讨。本课题运用MTT法检测文殊兰弱碱性生物碱对四种肿瘤细胞增殖的抑制作用并选取敏感细胞株进行抗肿瘤机制研究;分别采用荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察药物作用后HepG-2肿瘤细胞凋亡后形态学变化和早中晚期凋亡的区别;采用流式细胞仪检测文殊兰弱碱性生物碱对HepG-2细胞凋亡的影响以及其细胞周期变化情况;最后采用流式细胞仪检测细胞周期蛋白CyclinA1的变化以及细胞周期蛋白依赖性激酶CDK2改变。研究发现,文殊兰弱碱性生物碱对四种肿瘤细胞都有较强的生长抑制作用,并且与剂量呈正相关依赖性。其中对MCF-7细胞给药后72h的IC50值为28.10μg/mL;对SMMC7721细胞给药后72h的IC50值为23.20μg/mL;对SGC7901细胞给药后72h的IC50值为 20.71μg/mL;对 HepG-2 细胞给药后 72h 的 IC50值为 9.37μg/mL。各组 HepG-2细胞在荧光显微镜下出现了不同程度的深染鲜艳的细胞核和细胞质,并伴随有凋亡小体的形成。利用激光共聚焦显微镜观察早中晚期凋亡实验中,空白组无染色显示基本没有凋亡现象,低剂量组细胞外周为绿色显示出早期凋亡特征即细胞膜被染色,中剂量和高剂量组细胞为红色显示出中晚期凋亡的特征即细胞核被染色,而且凋亡细胞数量也随着剂量的增加而增加。流式细胞仪检测文殊兰弱碱性生物碱可以与剂量呈正相关依赖性的使HepG-2细胞发生凋亡,而细胞周期显示,S期细胞数明显增加,从而影响细胞周期紊乱导致周期阻滞后凋亡。流式细胞仪检测HepG-2肿瘤细胞中,细胞周期蛋白CyclinA1蛋白表达量和细胞周期依赖激酶CDK2表达量都较空白组显著提高。结论:文殊兰弱碱性生物碱对MCF-7细胞株、SMMC7721细胞株、SGC7901细胞株、HepG-2的生长有较强的抑制作用,可以诱导凋亡,且对HepG-2凋亡最为明显,其机制与给药后HepG-2细胞S期数量增加有关。文殊兰弱碱性生物碱通过高表达特异性细胞周期蛋白CyclinA1表达,同时上调CDK2,从而实现S期周期阻滞而诱导HepG-2细胞凋亡。