曲古抑菌素A对人结肠癌细胞系HT-29细胞增值和凋亡的影响

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目的:研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(trichostatinA,TSA)对人结肠癌细胞株HT-29增殖和凋亡的影响及可能的作用机制。方法:(1)应用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度(100nmol/L、200nmol/L、400nmol/L、800nmol/L、1000nmol/L)和不同作用时间(24h、48h、72h)的TSA对人结肠癌HT-29株细胞增值的抑制作用。(2)应用流式细胞仪(FCM)研究TSA对结肠癌HT-29细胞株细胞周期和凋亡的影响,计算细胞凋亡率。(3)应用RT-PCR及Western Blot分别检测HT-29细胞p21、bax和bcl-2的mRNA以及蛋白的表达。结果:(1)MTT法显示不同药物浓度组均可抑制HT-29细胞的生长,且呈时间和剂量依赖性,各实验组之间及实验组与对照组差别均有统计学意义(p<0.05)。(2)流式细胞仪(FCM)检测后发现经不同浓度TSA作用48小时后,HT-29细胞凋亡增加,G0/G1期比例增加,S期细胞比例下降,且呈时间依赖性,差异有统计学意义(p<0.05)。(3)RT-PCR检测表明,经不同浓度TSA作用48小时后,HT-29细胞的p21以及bax mRNA的表达随TSA浓度增加而增加,bcl-2mRNA的表达随TSA浓度增加而下降(p<0.05)。Western Blot法结果显示经TSA作用48小时后HT-29细胞的p21和bax蛋白表达随TSA浓度增加而增加,bcl-2蛋白表达随TSA浓度增加而下降(p<0.05)。结论:(1)TSA可以在一定剂量范围内诱导体外培养的人结肠癌HT-29细胞凋亡,且将细胞周期阻滞于G0/G1期。(2)TSA对HT-29细胞生长抑制和诱导凋亡作用可能与上调p21和bax基因转录和蛋白表达、下调Bcl-2基因转录和蛋白表达有关。
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