伴随着国际原研生物药专利的到期以及多种疾病的需要等因素增加了市场对生物药的需求,国内生物药迎来巨大的发展机遇。抗体药物是生物药的一个重要组成部分,其研究发展也最快,从20世纪80年代中期开始,相继被批准上市的抗体药物已有40多个,有350多个抗体药物处在临床研究阶段。相比于以往的小分子药物,抗体药物具有特异性强、高活性、生物功能明确、低毒性、半衰期长、有利于临床应用等优点。尽管抗体药物有许多优点,但是,不同的病人接受抗体药物治疗后表现出不同的临床反应。为实现用药的个体化,保证用药的安全性,最大程度上减小用药的盲目性,同时更好地符合法规要求,建立一种更为快速、准确的血药浓度检测平台,能为今后血药浓度的监测提供必要的支持。液相色谱质谱联用(LC-MS/MS)技术因其高灵敏度、高准确性等特点已经成为大分子研究领域的一种关键技术,除了配体结合方法外,它可以作为一种测定生物基质中抗体药物浓度的方法。虽然已有报道用免疫学方法测定了英夫利昔单抗的血药浓度,但目前还没有用LC-MS/MS方法来定量英夫利昔单抗血药浓度的研究。本课题建立了用LC-MS/MS技术测定人血清中英夫利昔单抗浓度的方法并对方法学进行了全面的验证。首先我们将英夫利昔单抗用胰酶酶切,选取了一段特征性肽段来代表整个抗体进行定量,同时用稳定性同位素标记此段肽作为内标。结果显示:线性范围为0.39-100μg/m L,最低定量限(LLOQ)和最低检测限(LLOD)分别为0.39μg/m L和0.0975μg/m L。质量控制结果表明批内、批间的精密度(%RSD)和准确度(%RE)都符合法规要求(RSD<15%,LLOQ附近RSD<20%;RE<15%,LLOQ附近RE<20%)。此外,还验证了方法的特异性、样品回收率、血清基质效应、稳定性和样品残留量。最后,我们用LC-MS/MS方法测定了I期临床试验注射了低剂量组的英夫利昔单抗的受试者血清样品,并与ELISA方法作了对比,两种方法的测定结果较为一致。这种LC-MS/MS方法可以为其他单克隆抗体血药浓度测定提供参考;同时,LC-MS/MS技术在血药浓度方面的应用范围也将逐渐扩大,能有力地促进生物制药行业的发展。