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黄蜀葵花为“疮家要药,治诸恶疮脓水久不瘥者,作末敷之即愈,消疽肿,浸油涂汤火伤等”。临床外用治疗慢性溃疡效果显著。现代药理学研究也发现其有效成分黄蜀葵花总黄酮对心脑缺血损伤具有明显的保护作用。本论文对黄蜀葵花总黄酮促血管新生作用及部分分子机制进行研究,主要内容有以下几个部分：第一部分：理论研究对血管新生过程及调节机制、治疗性血管新生进展、中医药促血管新生研究现状、黄蜀葵花及其总黄酮的临床应用和基础研究概况进行了系统的总结和阐述。血管新生从内皮细胞增殖游走开始,经过增殖、迁移和分化,至管腔形成、血管成熟和稳定,其过程中有以血管内皮生长因子为主的多种因子参与调节。对促血管新生治疗疾病的研究目前主要集中在缺血性疾病及组织工程方面,主要应用多种血管生成诱导剂或采用血管生成因子相关的基因治疗,动物模型和临床实验结果得到肯定。中医药治疗缺血性疾病历史悠久,效果肯定,临床经验丰富,促血管新生的基础实验研究也已经开始起步。黄蜀葵花总黄酮在心脑缺血性损伤动物模型中显示出良好的保护作用。第二部分：实验研究1、黄蜀葵花总黄酮对人脐静脉血管内皮细胞增殖、迁移和小管形成的影响。采用MTT法测定了不同浓度的黄蜀葵花总黄酮对人脐静脉血管内皮细胞增殖的影响,筛选出有效作用浓度和作用时间；应用流式细胞技术观察黄蜀葵花总黄酮对人脐静脉血管内皮细胞细胞周期的影响；利用transwell小室、体外小管形成实验观察药物对人脐静脉血管内皮细胞细胞迁移、成血管能力的影响。结果：药物作用72h时,TFA5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml组的吸光度明显增高,与对照组相比差异显著(p=0.002,0.000,0.050)；HUVEC细胞G0-G1期比例明显减少,S期比例明显增多,四组间各周期的细胞数比例差异显著(p=0.000)；5、10、20μg/ml的黄蜀葵花总黄酮能增加人脐静脉内皮细胞迁移数,与对照组相比,差异显著(p值分别为0.000、0.000、0.028),其中以10μg/ml药物浓度组细胞迁移数最多,其次是5μg/ml组和20μg/ml;浓度为10μg/ml TFA作用的人脐静脉血管内皮细胞小管形成比对照组明显增强,其次为20μg/ml浓度组,差异有统计学意义(p=0.000、0.013),而5μg/mlTFA组与对照组比较,差异不显著(p=0.096)。结论：5-20μg/ml TFA作用72h明显促进人脐静脉血管内皮细胞增殖,能使更多的细胞进入增殖旺盛期；能促进细胞的迁移；10-20μg/mlTFA能促进人脐静脉血管内皮细胞管样结构形成。2、黄蜀葵花总黄酮对人脐静脉血管内皮细胞凋亡及fas、bcl-2的影响。应用流式细胞技术观察黄蜀葵花总黄酮对人脐静脉血管内皮细胞凋亡及凋亡蛋白fas的影响；应用免疫细胞化学染色技术和免疫印迹技术观察黄蜀葵花总黄酮对人脐静脉血管内皮细胞凋亡蛋白bcl-2的影响。结果：人脐静脉内皮细胞经黄蜀葵花总黄酮作用72h后,对照组凋亡率为10.1%,TFA5μg/ml组凋亡率为7.2%,TFA10μg/ml组凋亡率为3.9%,TFA20μg/ml组凋亡率为8.5%。与对照组比较,差异显著(p<0.01)；5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml TFA均可使人脐静脉内皮细胞fas表达率下降,与对照组比较差异显著(p=0.000,0.000,0.028)；与对照组比较,TFA5μg/ml组作用后的HUVEC bcl-2表达稍高,差异无统计学意义(p=0.075),10、20μg/ml组bcl-2的表达差异有显著统计学意义(p=0.000),但明显低于对照组。结论：5-20μg/ml浓度范围的TFA可以抑制HUVEC的凋亡,其机制与下调HUVEC凋亡相关蛋白fas的表达有关；不能增加凋亡相关蛋白bcl-2在HUVEC中的表达。3、黄蜀葵花总黄酮对人脐静脉血管内皮细胞VEGF、KDR表达的影响。应用免疫细胞化学染色技术和免疫印迹技术观察黄蜀葵花总黄酮对人脐静脉血管内皮细胞内血管内皮生长因子及其受体KDR蛋白表达的影响。结果：VEGF在TFA作用后的HUVEC中呈强阳性表达,以10μg/ml组尤为明显,胞浆染色深度及范围均明显增强,不同浓度的TFA能使HUVEC中VEGF表达增强,与对照组相比,5、10、20μg/ml组p值分别为0.010,0.000,0.005。TFA10μg/ml作用后的HUVEC中KDR呈强阳性表达,胞浆、膜染色深度及范围均明显增强,明显增强HUVEC中KDR的表达,与对照组比较,p=0.007,而5、20μg/ml浓度TFA作用后KDR表达与对照组无明显改变(p>0.05)。结论：TFA通过增加细胞中VEGF的表达促进血管新生,还可能增加细胞中KDR表达。4、黄蜀葵花总黄酮对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管新生的影响。应用鸡胚绒毛尿囊膜模型,观察TFA对CAM血管新生的影响。结果：血管以载体为中心向四周呈放射状生长,以TFA10μg/ml组明显,并继续向外分支多级细小血管,大血管明显增多；5-20μg/mlTFA作用后的CAM血管数也明显增多,差异有显著统计学意义,与对照组相比,TFA5、10、20μg/ml组距载体边缘1mm血管数p值分别为0.000、0.000、0.000,三组距载体边缘5mm血管数p值均为0.000。结论：5-20μg/ml浓度的TFA能促进鸡胚绒毛尿囊膜血管生成,说明其在体内也有促血管新生作用。本研究表明,黄蜀葵花总黄酮对血管新生有明显的促进作用,促进血管内皮细胞增殖、迁移和管样结构形成,并抑制血管内皮细胞凋亡；其机制主要是上调血管内皮细胞VEGF的表达；并下调fas蛋白表达抑制细胞凋亡；一定浓度的黄蜀葵花总黄酮还可能通过上调VEGF受体KDR的表达；但不能通过上调bcl-2蛋白的表达来抑制血管内皮细胞凋亡。